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癌微小環境由来免疫抑制性エクソソームによる癌免疫逃避機構の解析

癌症微环境中的免疫抑制外泌体分析癌症免疫逃逸机制

基本信息

批准号：
20K08947
负责人：
尾上隆司
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Department of Clinical Research, National Hospital Organization Kure Medical Center
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K08947/
关键词：
癌微小環境エクソソーム免疫逃避腫瘍血管内皮

项目摘要

前年までのB16腫瘍細胞ー血管内皮細胞の連続培養系を用いたin vitroの実験で腫瘍微小環境を模した培養上清から分離したエクソソームがT細胞抑制性を持つことを明らかとした。このエクソソームをビーズを用いたフローサイトメトリーでの解析により、エクソソーム自体がクラスII、CD40などの副刺激分子を表出し、また抑制性リガンドであるPD-L1も表出することが明らかとなった。これらの結果より、腫瘍微小環境から免疫抑制性のエクソソームが分泌されていることが強く示唆された。次の段階としてOT-I transgenicマウスから分離したOVA特異的CD8＋T細胞とOVAパルスした骨髄由来樹状細胞の共培養下に、培養癌細胞由来エクソソーム用いたin vitro増殖抑制試験を行い、in vitroでの検証を行っている。B16メラノーマ腫瘍株をマウスに接種したin vivoマウス担癌モデルにおいて、炎症惹起アジュバントであるCFAを同時に接種し、炎症下における腫瘍の増殖を検討したところ、CFA接種炎症併存群ではコントロール群と比べ、有意に腫瘍増殖が促進され、炎症物質であるHMGB1中和抗体投与により、増殖促進が抑制されたことから、HMGB1と抑制性エクソソームの因果関係が示唆された。そこで、次の段階としてOT-I transgenicマウスから分離したOVA特異的CD8＋T細胞とOVAパルスした骨髄由来樹状細胞の共培養下に、培養癌細胞由来エクソソーム用いたin vitro増殖抑制試験を行い、in vitroでの検証を行っている。さらにB16-OVAメラノーマ腫瘍株をマウスに接種したin vivoマウス担癌モデルにおいて、免疫抑制性エクソソーム分泌を促進する可能性のあるHMGB1の中和薬剤を投与し、OT-I細胞を移入し抗原特異的免疫反応の解析を行っている。

B16 tumor cells and vascular endothelial cells were cultured in vitro in 2006. The supernatant was isolated from the supernatant of the tumor cells and the inhibitory effect of T cells was detected. The expression of PD-L1, an inhibitor of PD-L1, was detected by the analysis of PD-L1 and PD-L1 in the presence of PD-L1. As a result of this, the immune suppression of micro-environment, tumor secretion, and strong immune response OVA-specific CD8 +T cells and OVA-specific dendritic cells were isolated and cultured in vitro. B16-HMGB1-HMGB1-H HMGB1 and inhibition of the causal relationship between the two groups. CD8 +T cells were isolated from dendritic cells in co-culture with cultured cancer cells in vitro. In addition, B16-OVA can be inoculated in vivo, and the possibility of promoting the secretion of immunosuppressive drugs, neutralizing agents of HMGB1, and the transformation of OT-I cells into antigen-specific immune responses can be investigated.