Targetting aggresome formation in metastatic breast cancer cells

靶向转移性乳腺癌细胞中的聚集体形成

基本信息

批准号：
20K08970
负责人：
風間宏美
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Tokyo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

難治性乳癌治療を目的として、乳癌細胞株MDA-MB231、MDA-MB468、SKBR3に、ヒストン脱アセチル化酵素(HDAC)阻害剤であるリコリノスタット(RCS)（HDAC6に対する選択性が高い）と、プロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ(BTZ)を同時添加した。その結果、全細胞株で単剤添加と比較して相乗的な殺細胞増強効果を認めた。この効果はHDAC6の特異的阻害試薬TubacinとBTZとの併用でも同様に観察された。Annexin-V陽性/PI陰性細胞の出現ならびにcaspase-3の活性化が弱いことから、古典的アポトーシス経路を介さない細胞死誘導が示唆された。また、ERAI-XBP1-Venusプローブを用いた小胞体（ER）ストレス経時的定量解析法でも、両薬剤併用で顕著にストレス負荷が増大し、それに伴う細胞死の増強とERの膨化も観察された。このERの膨化は、透過型電子顕微鏡による観察においても確認された。ERストレス負荷を示すタンパク質GRP78、p-PERK, p-eIF2αの発現も上昇していた。RCSとBTZの併用によりROS産生が顕著に上昇したが、ミトコンドリアに由来しないROS産生がMitoSOX解析から示された。さらに、ROSのscavengerであるN-acetyl cysteineおよびglutathione ethyl esterの存在下では、ROS産生、ERストレス負荷、殺細胞増強効果の全てがほぼ完全にキャンセルされた。また、de novoタンパク質合成を抑制するシクロヘキサミドを同時添加すると、2剤併用によるERストレス、ROS産生、および殺細胞増強効果は全て抑制された。以上より、両薬剤併用において、翻訳に伴う小胞体内のROS産生亢進とERストレス負荷が相互に連関して、強力な癌細胞死を誘導していると考えられる。

为了治疗难治性乳腺癌，乳腺癌细胞系MDA-MB231，MDA-MB468和SKBR3同时添加了licorinostat（RCS），一种组蛋白脱乙酰基酶（HDAC）抑制剂（HDAC6），以及蛋白酶抑制剂（HDAC），以及蛋白酶抑制剂蛋白酶抑制剂borteitor borteborbortezomib（btz）。结果，与添加单个药物相比，在所有细胞系中都观察到协同的细胞杀伤效应。同样观察到这种效果与HDAC6的特异性抑制剂tubacin和BTZ结合使用。膜联蛋白-V阳性/PI阴性细胞的出现和caspase-3的弱激活表明没有经典凋亡途径的细胞死亡诱导。此外，在使用ERAI-XBP1-Venus探针随时间推移内质网（ER）应力的定量分析中，两种药物的应力载荷显着增加，细胞死亡和ER肿胀被显着增加。通过使用透射电子显微镜观察，还通过观察来证实ER的这种肿胀。蛋白质GRP78，P-PERK和P-EIF2α的表达也升高。 RCS和BTZ的组合在ROS产生中显示出显着增加，但是Mitosox分析显示ROS产生不是从线粒体中得出的。此外，在存在ROS清除剂N-乙酰基半胱氨酸和谷胱甘肽乙酯的情况下，ROS产生，ER应力负荷和杀死细胞的增强效应几乎被几乎完全取消。此外，同时添加抑制从头蛋白合成的环己酰胺，抑制了ER应激，ROS产生和两种药物组合的细胞杀伤性增强的影响。从上面可以看出，在两种药物中，内质网中ROS的产生增加以及与翻译相关的ER应力负荷彼此相关，从而导致癌细胞死亡强。