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Targetting aggresome formation in metastatic breast cancer cells

靶向转移性乳腺癌细胞中的聚集体形成

基本信息

批准号：
20K08970
负责人：
風間宏美
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Tokyo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

難治性乳癌治療を目的として、乳癌細胞株MDA-MB231、MDA-MB468、SKBR3に、ヒストン脱アセチル化酵素(HDAC)阻害剤であるリコリノスタット(RCS)（HDAC6に対する選択性が高い）と、プロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ(BTZ)を同時添加した。その結果、全細胞株で単剤添加と比較して相乗的な殺細胞増強効果を認めた。この効果はHDAC6の特異的阻害試薬TubacinとBTZとの併用でも同様に観察された。Annexin-V陽性/PI陰性細胞の出現ならびにcaspase-3の活性化が弱いことから、古典的アポトーシス経路を介さない細胞死誘導が示唆された。また、ERAI-XBP1-Venusプローブを用いた小胞体（ER）ストレス経時的定量解析法でも、両薬剤併用で顕著にストレス負荷が増大し、それに伴う細胞死の増強とERの膨化も観察された。このERの膨化は、透過型電子顕微鏡による観察においても確認された。ERストレス負荷を示すタンパク質GRP78、p-PERK, p-eIF2αの発現も上昇していた。RCSとBTZの併用によりROS産生が顕著に上昇したが、ミトコンドリアに由来しないROS産生がMitoSOX解析から示された。さらに、ROSのscavengerであるN-acetyl cysteineおよびglutathione ethyl esterの存在下では、ROS産生、ERストレス負荷、殺細胞増強効果の全てがほぼ完全にキャンセルされた。また、de novoタンパク質合成を抑制するシクロヘキサミドを同時添加すると、2剤併用によるERストレス、ROS産生、および殺細胞増強効果は全て抑制された。以上より、両薬剤併用において、翻訳に伴う小胞体内のROS産生亢進とERストレス負荷が相互に連関して、強力な癌細胞死を誘導していると考えられる。

Refractory breast cancer treatment target, breast cancer cell lines MDA-MB231, MDA-MB468, SKBR3, HDAC enzyme (HDAC) Harmful material (RCS) (HDAC6 high performance)い)と, プロテアソームblocking 剤ボルテゾミブ(BTZ)をした was added at the same time. As a result, the cell-killing enhancement effect of the multiplication was confirmed by comparing the addition of whole cell lines. The specific inhibitory effect of HDAC6 is tested by using Tubacin and BTZ together. The appearance of Annexin-V positive/PI negative cells is the activation of caspase-3, the activation of caspase-3, and the classical activation of caspase-3 and the induction of cell death. Quantitative analysis method when using the ERAI-XBP1-Venus system using the ERAI-XBP1-Venus small cell body (ER)も, 両薬艤 Combined use of で顕上にストレス load がincrease large し, それに companion のincrease strength とERのpuffing も観看された.このERのexpansionは、transmission type electron microscope による観看においてもconfirmationされた. The ER-containing load was determined by the quality of GRP78, p-PERK, and p-eIF2α. RCS and BTZ are combined with ROS-generated MitoSOX analysis and MitoSOX analysis.さらに、ROSのscavengerであるN-acetyl cysteineおよびglutathione ethyl In the presence of ester, ROS production, ER load, and cell-killing enhancement effect are fully achieved.また、de novoタンパク性综合を suppresses するシクロヘキサミドを and adds すると, 2剤 merge at the same time It uses によるERストレス, ROS production, and およびcytocidal enhancement effect and suppresses all the された. The combined use of the above より and 両薬褤, において, and 訳訳に, results in increased production of ROS in small cells and ER It is a load-bearing, mutually-related, and powerful inducer of cancer cell death.