シングルセル解析による歯根膜由来間葉系幹細胞の再生機構の解明

单细胞分析阐明牙周膜间充质干细胞的再生机制

• 批准号: 20K09989
• 负责人: 妻沼 有香
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2021-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K09989/
• 关键词: 歯根膜由来間葉系幹細胞

本研究は、ヒト歯根膜由来間葉系幹細胞（MSC）のシングルセル解析を行うことで、これまで集団としてしか解析してこなかった細胞について、個々の細胞の特徴を把握し、その細胞の特徴を生かした再生医療への応用を目的としている。これまでヒト歯根膜由来MSCのシングルセル解析の報告はないため、シングルセル解析での細胞の不均一性、均一性を明らかとすること。また解析するのみにとどまらず、解析結果を用いることで、特異的な遺伝子発現が歯周組織の再生にどのように影響を与えるかを明らかにすることを目指している。シングルセル解析の具体的な方法としては、若年者の健常人から採取した抜去歯を用いてヒト歯根膜由来MSCを単離する。単離した異なるドナーで継代数の様々な細胞をシングルセル解析システムを用いて　50細胞から100細胞程度に単離する。この個々の細胞から抽出したRNAを用いてシングルセルRNAシーケンスを行う。今年度は、歯根膜由来MSCの採取のための、倫理審査のための準備や、シングルセル解析を行うための、手技の習得及び条件の検討を行った。特にシングルセル解析では、シングルセルにする際の細胞の状態が、結果に与える影響が大きいため、どのように細胞の準備を行うべきかについての検討を行った。今後最適な条件下で解析を行っていく予定であったが、研究代表者の兼務している他機関での業務の都合により、研究の継続が困難となったため、研究を中断することとなった。

这项研究旨在了解仅通过对人类牙周韧带间充质干细胞（MSC）进行单细胞分析（MSC）的单细胞分析，并将其应用于利用这些细胞特征的再生药物，从而了解仅作为组的单个细胞的特征。由于迄今尚未报告人类牙周韧带衍生的MSC的单细胞分析，因此我们将在单细胞分析中阐明细胞的异质性和均匀性。此外，通过使用分析结果，目的是阐明特定基因表达如何影响牙周组织再生。单细胞分析的一种特定方法是使用从健康的年轻人中收集的牙齿分离人类牙周韧带衍生的MSC。使用单个细胞分析系统从50至100个细胞中分离出不同孤立供体的各种传递数量的细胞。使用从单个细胞中提取的RNA进行单细胞RNA序列。今年，我们研究了收集牙周韧带衍生的MSC的技术和条件的获取，准备道德检查和单细胞分析。特别是，在单细胞分析中，制作单个细胞时的细胞状况对结果具有很大的影响，因此我们研究了如何进行细胞制备。我们计划将来在最佳条件下进行分析，但是由于其他机构的工作，主要研究人员也负责，因此很难继续进行研究，并且该研究被暂停。