歯根膜細胞移植における脈管系並びに神経組織の再生機序の解明

阐明牙周膜细胞移植中血管系统和神经组织的再生机制

• 批准号: 12J06896
• 负责人: 妻沼 有香
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012 至 2013
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12J06896/
• 关键词: 歯根膜細胞; 神経再生; 血管再生; 細胞移植; 細胞シート; イヌ水平性骨欠損モデル; 同種移植; GFP; 免疫染色; 神経; 血管

本年度は主に神経および血管が再生するメカニズムをin vitroにて明らかにすることを試みた。ヒト歯根膜細胞においては、骨髄由来細胞と比較して、神経関連遺伝子の発現が有意に高いことが報告されている。また同じくヒト歯根膜細胞においては、造血幹細胞由来の遺伝子発現の上昇がすでに知られている。そこで、種が違った場合、また細胞種が異なる場合にはどのような遺伝子発現が認められるかを明らかとすることとした。これまでイヌを用いて動物実験を行ってきたため、今回もイヌから採取した細胞を用いて検討することとした。また歯根膜細胞と比較する細胞として、同じく口腔内から採取可能な骨膜細胞・歯肉由来細胞。また臨床応用に幅広く用いられている骨髄間葉系幹細胞と脂肪由来幹細胞を採取して用いることとした。同一個体からサンプルを採取し、5種類すべての細胞のプライマリーカルチャーを行った。これらの細胞のプロパティを比較するため、コロニーフォーミングアッセイ(CFA)、骨・脂肪・軟骨分化誘導試験を行った。CFA、骨・脂肪・軟骨分化能に、細胞種間で明らかな差があった。また増殖能について比較を行ったところ、増殖能については顕著な差は認められなかった。フローサイトメトリーを用いた間葉系幹細胞マーカーの発現の比較も行ったが、細胞間で特異的な違いは認められなかった。またこれらの細胞より継代数3においてRNAを抽出した。採取したRNAを用いた神経・血管関連遺伝子発現の解析を、今後行う予定である。またさらに次世代シーケンサを用いた解析も視野に入れている。直接的に神経・血管細胞への分化誘導試験も行う予定である

今年，我们试图阐明神经和血管的机制主要是体外。据报道，在人牙周韧带细胞中，与骨髓衍生的细胞的表达显着高于骨髓衍生的细胞。同样，在人类牙周韧带细胞中，已经知道造血干细胞的基因表达升高。因此，决定阐明当物种不同以及细胞类型不同时观察到什么样的基因表达。由于到目前为止使用狗进行了动物实验，因此我们决定这次再次使用狗从狗中收集的细胞。同样，可以将可以与牙周韧带细胞进行比较的细胞是骨膜和牙龈衍生细胞，也可以从口腔内收集。此外，收集并使用了广泛用于临床应用的骨髓间充质干细胞和脂肪衍生的干细胞。从同一个体收集样品，并对所有五种细胞进行原代培养。为了比较这些细胞的特性，进行了菌落形成测定（CFA），骨，脂肪和软骨分化诱导试验。细胞类型之间的CFA，骨，脂肪和软骨分化潜力存在明显差异。此外，在比较增殖潜力时，在增殖潜力中没有发现显着差异。我们还使用流式细胞术比较了间充质干细胞标记的表达，但是在细胞之间未观察到具体差异。从这些细胞中提取RNA。我们计划将来使用收集的RNA分析神经血管相关的基因表达。此外，还考虑了使用下一代序列仪的分析。我们还将进行直接测试，以诱导分化为神经和血管细胞。

项目成果

Allogeneic transplantation of periodontal cell sheets in a canine horizontal defects

犬水平缺损牙周细胞片的同种异体移植

• 发表时间: 2013
• 作者: Tsumanuma Y;Iwata T;Kinoshita A;Washio K;Yoshida T;Yamada A;Ishikawa I;Yamato M;Okano T;Izumi Y
• 通讯作者: Izumi Y

イヌ水平性骨欠損モデルにおける同種の歯根膜細胞シートを用いた歯周組織再生

在犬水平骨缺损模型中使用同种异体牙周膜细胞片进行牙周组织再生

• 发表时间: 2013
• 作者: 妻沼有香;岩田隆紀;木下淳博;鷲尾薫;葭田敏之;山田梓;大和雅之;石川烈;岡野光夫;和泉雄一
• 通讯作者: 和泉雄一

歯周組織再生における異なる組織由来細胞シートの比較

不同组织细胞片层在牙周组织再生中的比较

• 发表时间: 2012
• 作者: 妻沼有香;岩田隆紀;鷲尾薫;葭田敏之;山田梓;石川烈;大和雅之;岡野光夫;和泉雄一
• 通讯作者: 和泉雄一

Allogeneic transplantation of periodontal cell sheets in canine horizontal defects

犬水平缺损牙周细胞片同种异体移植

• 发表时间: 2012
• 作者: Yuka Tsumanuma;Takanori Iwata;Atsuhiro Kinoshita;Kaoru Washio;Toshiyuki Yoshida;Azusa Yamada;Isao Ishikawa;Masayuki Yamato;Teruo Okano;Yuichi Izumi
• 通讯作者: Yuichi Izumi