唾液腺幹細胞を用いた新規器官再生法の確立と臨床応用

本研究は成体マウスから唾液腺幹細胞を樹立し、これを幹細胞のソースとして器官再生や幹細胞移入を行い、生体の唾液腺再生法の構築と臨床応用を目指している。2020年度は8週齢のC57BL/6Jマウスから顎下腺を摘出して細切し、プラスチックディッシュ上に付着させた後に低Ca（0.2mM）無血清 MCDB153/DMEM培地を加えて培養し、唾液腺幹細胞を分離した（分離細胞A）。その細胞はPan-CKとE-cadherin、CK-18、CK-19は陽性で、AQ5、Amylase、α-SMAは陰性であった。Ca濃度を上昇させることにより、Amylaseタンパク発現の上昇、AQ5の軽度上昇を認め唾液腺固有の機能が確認された。2021年度は成体マウスから顎下腺を摘出し、1mm以下に細切した後にコラゲナーゼ typeIIとヒアルロニダーゼが入ったMEMで2時間処理を行った。回収した細胞をMatrigelTM-growth factor reduced で被覆したプラスチックプレート上でDMEM/F12にEGFやFGF10などの因子を加えた培養液にて培養し、オルガノイドの周囲に発生した細胞を分離した（分離細胞B）。その細胞の多くがp63に陽性を示し、αSMA陽性細胞が散見され、AQ5はほとんどが陰性を示した。このことより、この分離細胞群には多くの幹細胞や一部筋上皮細胞に分化した細胞が含まれている可能性が示唆された。2022年度は分離細胞A、Bの分化誘導に際し、細胞外基質（フィブロネクチン、ラミニン、IV型コラーゲン）とHGFがどのような影響を及ぼすかを検討した。分離細胞AはIV型コラーゲン及びHGFの刺激によってAmylaseの増加が確認された。AQ5は明らかな増加は確認できなかった。分離細胞BではHGF刺激でAmylaseの増加が確認され、細胞外基質の影響は明確ではなかった。

本研究は成体マウスから唾液腺幹細胞を樹立し、これを幹細胞のソースとして器官再生や幹細胞移入を行い、生体の唾液腺再生法の構築と臨床応用を目指している。2020年度は8週齢のC57BL/6Jマウスから顎下腺を摘出して細切し、プラスチックディッシュ上に付着させた後に低Ca（0.2mM）無血清 MCDB153/DMEM培地を加えて培養し、唾液腺幹細胞を分離した（分離細胞A）。その細胞はPan-CKとE-cadherin、CK-18、CK-19は陽性で、AQ5、Amylase、α-SMAは陰性であった。Ca濃度を上昇させることにより、Amylaseタンパク発現の上昇、AQ5の軽度上昇を認め唾液腺固有の機能が確認された。2021年度は成体マウスから顎下腺を摘出し、1mm以下に細切した後にコラゲナーゼ typeIIとヒアルロニダーゼが入ったMEMで2時間処理を行った。回収した細胞をMatrigelTM-growth factor reduced で被覆したプラスチックプレート上でDMEM/F12にEGFやFGF10などの因子を加えた培養液にて培養し、オルガノイドの周囲に発生した細胞を分離した（分離細胞B）。その細胞の多くがp63に陽性を示し、αSMA陽性細胞が散見され、AQ5はほとんどが陰性を示した。このことより、この分離細胞群には多くの幹細胞や一部筋上皮細胞に分化した細胞が含まれている可能性が示唆された。2022年度は分離細胞A、Bの分化誘導に際し、細胞外基質（フィブロネクチン、ラミニン、IV型コラーゲン）とHGFがどのような影響を及ぼすかを検討した。分離細胞AはIV型コラーゲン及びHGFの刺激によってAmylaseの増加が確認された。AQ5は明らかな増加は確認できなかった。分離細胞BではHGF刺激でAmylaseの増加が確認され、細胞外基質の影響は明確ではなかった。