唾液腺幹細胞を用いた新規器官再生法の確立と臨床応用

唾液腺干细胞器官再生新方法的建立及临床应用

• 批准号: 20K10129
• 负责人: 平木 昭光
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Fukuoka Dental College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K10129/
• 关键词: 唾液腺; 再生; 分化

本研究は成体マウスから唾液腺幹細胞を樹立し、これを幹細胞のソースとして器官再生や幹細胞移入を行い、生体の唾液腺再生法の構築と臨床応用を目指している。2020年度は8週齢のC57BL/6Jマウスから顎下腺を摘出して細切し、プラスチックディッシュ上に付着させた後に低Ca（0.2mM）無血清 MCDB153/DMEM培地を加えて培養し、唾液腺幹細胞を分離した（分離細胞A）。その細胞はPan-CKとE-cadherin、CK-18、CK-19は陽性で、AQ5、Amylase、α-SMAは陰性であった。Ca濃度を上昇させることにより、Amylaseタンパク発現の上昇、AQ5の軽度上昇を認め唾液腺固有の機能が確認された。2021年度は成体マウスから顎下腺を摘出し、1mm以下に細切した後にコラゲナーゼ typeIIとヒアルロニダーゼが入ったMEMで2時間処理を行った。回収した細胞をMatrigelTM-growth factor reduced で被覆したプラスチックプレート上でDMEM/F12にEGFやFGF10などの因子を加えた培養液にて培養し、オルガノイドの周囲に発生した細胞を分離した（分離細胞B）。その細胞の多くがp63に陽性を示し、αSMA陽性細胞が散見され、AQ5はほとんどが陰性を示した。このことより、この分離細胞群には多くの幹細胞や一部筋上皮細胞に分化した細胞が含まれている可能性が示唆された。2022年度は分離細胞A、Bの分化誘導に際し、細胞外基質（フィブロネクチン、ラミニン、IV型コラーゲン）とHGFがどのような影響を及ぼすかを検討した。分離細胞AはIV型コラーゲン及びHGFの刺激によってAmylaseの増加が確認された。AQ5は明らかな増加は確認できなかった。分離細胞BではHGF刺激でAmylaseの増加が確認され、細胞外基質の影響は明確ではなかった。

This study aims to establish adult salivary gland stem cells, develop stem cells for organ regeneration, transplant stem cells, construct salivary gland regeneration methods in vivo, and provide guidance for clinical application. In 2020, C57BL/6J cells were isolated from submandibular glands at 8 weeks old and then cultured in low Ca (0.2mM) serum-free MCDB153/DMEM medium. Salivary gland stem cells were isolated (isolated cells A). Pan-CK E-cadherin, CK-18, CK-19 Positive, AQ5, Amylase, α-SMA Negative The increase of Ca concentration, the increase of Amylase activity, the increase of AQ5 activity, and the recognition of the inherent function of salivary glands were confirmed. In 2021, the submandibular gland was removed, and the fine cut was less than 1 mm. The cells were cultured in DMEM/F12 medium supplemented with EGF and FGF10 factors, and the cells were isolated (isolated cells B). Many of the cells were p63 positive, αSMA positive and AQ5 negative. This is the first time that a cell population has been isolated from stem cells and some tendon epithelial cells. In 2022, we will investigate the effects of HGF on differentiation induction of isolated cells A and B, extracellular matrix (extracellular matrix) and HGF. The increase of amylases in isolated cells was confirmed by the stimulation of HGF and type IV amylases. AQ5 In isolated cells B, HGF stimulation was associated with an increase in Amylase activity and an increase in extracellular matrix activity.

项目成果

Role of serum amylase and salivary cytokines in oral complications during chemoradiotherapy

血清淀粉酶和唾液细胞因子在放化疗期间口腔并发症中的作用

• DOI: 10.1111/odi.13686
• 发表时间: 2020
• 期刊: Oral Diseases
• 影响因子: 3.8
• 作者: Kawahara Kenta;Hiraki Akimitsu;Arita Hidetaka;Takeshita Hisashi;Hirosue Akiyuki;Matsuoka Yuichiro;Sakata Junki;Obayashi Yuko;Nakashima Hikaru;Hirayama Mayumi;Nagata Masashi;Yoshida Ryoji;Shinohara Masanori;Nakayama Hideki
• 通讯作者: Nakayama Hideki