脱分化脂肪細胞由来エクソソームが拓く広域下顎骨骨欠損の再建

使用去分化脂肪细胞来源的外泌体重建广泛的下颌骨缺损

• 批准号: 20K10195
• 负责人: 窪 寛仁
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Osaka Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K10195/
• 关键词: エクソソーム; 脂肪由来脱分化脂肪細胞; 脱分化脂肪細胞

顎顔面領域における下顎骨欠損は先天性のほか、外傷、感染、腫瘍の切除によって生じ、これに対して、骨移植や仮骨延長による骨の再建が行われてきた。しかし、侵襲性の点から、今後は細胞を用いた再生医療による安全で確実な骨増生が望まれている。再生医療の三要素である細胞には、純度が高く分化能の高いヒト頬脂肪体由来脱分化脂肪細（DFATs）、シグナル因子は、血管新生作用を有しドラッグデリバリーの役割もかねたDFATsエクソソームを用いる。さらにそれらの担持に適した表面荷電を持つコラーゲンスポンジ足場材料を探索し、ビーグル犬の広域下顎骨骨再生モデルに三要素を移植する、広域下顎骨骨欠損治療のトランスレーショナル研究を行う。大型動物としての前段階として、ラット脂肪体より採取された脂肪組織を細切し，コラゲナーゼ溶液中処理する。得られた成熟脂肪細胞を培地で完全に満たされたフラスコに播種し，脂肪細胞がフラスコ内側の天井表面に接着するようフラスコの接着面を上方にして，培養した。7日後、培地を除去し，細胞がフラスコ底面に位置するようにフラスコを反対し、通常培養を開始することでラットのDFATsの作製に成功した。培養上清からqEV抽出カラムを用いてエクソソームを抽出した。メンブレンを使用しているため、EVのサイズは70 nm以下に統一した。 Ev の形態は、脂肪幹細胞（ADSC）と比較して違いはなかった。 この研究では、DFAT と ADSC の間の細胞外小胞における CD マーカー発現による特徴の違いは見つからなかった。本調査結果は、骨組織再生における無細胞治療戦略の開発の実験的基礎を提供する可能性がある。

Mandible defects in the facial region include congenital defects, trauma, infection, tumor resection, bone regeneration, bone transplantation, and bone lengthening. In the future, the use of cells in regenerative medicine will be safe and secure. The three elements of regenerative medicine are cell differentiation, purity, high differentiation ability, high fat body origin, dedifferentiation fat cells (DFATs), sikal factors, angiogenesis, and the use of DFATs. The research on the three factors of bone regeneration of mandible in dogs and the treatment of mandible defects in dogs was carried out. Large animals are processed in aqueous solutions by slicing subcutaneous fat. The mature adipocytes were cultured completely and sown on the inner surface of the adipocytes and on the upper surface of the adipocytes. After 7 days, the culture medium was removed and the DFATs were successfully produced. The culture supernatant was extracted from the culture medium. For example, if you want to use the EV, you can use the EV below 70 nm. Ev morphology, adipose stem cells (ADSC) and comparison. This study was carried out in the presence of extracellular vesicles between DFAT and ADSC. The results of this study may provide a basis for the development of cell-free therapy strategies for bone regeneration.

项目成果

Characterization of extracellular vesicles isolated from dedifferentiated fat cell’s conditioned media

从去分化脂肪细胞的条件培养基中分离的细胞外囊泡的表征

• 发表时间: 2022
• 作者: Yusuke Nishiguchi;Mamoru Ueda;Hirohito Kubo;Yoshiya Hashimoto
• 通讯作者: Yoshiya Hashimoto

ラット由来脱分化脂肪細胞と活性化多血小板血漿を用いた骨再生

使用大鼠来源的去分化脂肪细胞和活化的富含血小板的血浆进行骨再生

• 发表时间: 2020
• 作者: 中嶋 千惠;柳生 貴裕;山川 延宏;上田 順宏;桐田 忠昭;中野宏祐，窪 寛仁，本田義知，橋本典也，中嶋正博
• 通讯作者: 中野宏祐，窪 寛仁，本田義知，橋本典也，中嶋正博

Bone Regeneration by Dedifferentiated Fat Cells Using Composite Sponge of Alfa-Tricalcium Phosphate and Gelatin in a Rat Calvarial Defect Model

在大鼠颅骨缺损模型中使用α-磷酸三钙和明胶复合海绵进行去分化脂肪细胞的骨再生

• DOI: 10.3390/app112411941
• 发表时间: 2021
• 期刊: Applied Sciences
• 作者: Tsumano Nobuhito;Kubo Hirohito;Imataki Rie;Honda Yoshitomo;Hashimoto Yoshiya;Nakajima Masahiro
• 通讯作者: Nakajima Masahiro

ラット頭蓋冠欠損モデルにおけるアルファリン酸三カルシウムとゼラチンの複合スポンジを用いた脱分化脂肪細胞による骨再生

在大鼠颅骨缺损模型中使用α磷酸三钙和明胶复合海绵进行去分化脂肪细胞的骨再生

• 发表时间: 2021
• 作者: 大野 由夏;小長谷 光;妻野誠仁，窪 寛仁，今滝梨江，本田義知，橋本典也，中嶋正博
• 通讯作者: 妻野誠仁，窪 寛仁，今滝梨江，本田義知，橋本典也，中嶋正博

ラット脱分化脂肪細胞(DFATs)と活性化多血小板血漿(aPRP)を用いた骨芽細胞分化能と骨再生

使用大鼠去分化脂肪细胞（DFAT）和活化的富含血小板血浆（aPRP）的成骨细胞分化能力和骨再生

• 发表时间: 2020
• 作者: Takahashi Osamu;Tanaka Junpei;Habu Manabu;Yoshiga Daigo;Sasaguri Masaaki;Uehara Masataka;Hayakawa Mana;Yoshioka Izumi;Tominaga Kazuhiro;Okada-Ogawa A;中野宏祐，窪 寛仁，上田 衛，妻野誠仁，中嶋正博
• 通讯作者: 中野宏祐，窪 寛仁，上田 衛，妻野誠仁，中嶋正博