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GPCRクラスA転写マップの作成～唾液腺由来のRNA核酸医療の骨再生への応用

GPCR A类转录图谱的创建——唾液腺RNA核酸药物在骨再生中的应用

基本信息

批准号：
20K10200
负责人：
渡一平
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K10200/
关键词：
骨芽細胞 GPCR GPCRクラスA RNA seq プリン受容体 P2X7 P2X4 唾液腺カルシウム・リン代謝 RNAサイレンシング遺伝子治療 GPCRクラスB 糖代謝 Transgenerational effect

项目摘要

Gタンパク質共役受容体（GPCR）のなかで、カルシウム・リン代謝を制御するGPCRクラスA（GPCR-A）は、その一部が骨形成抑制因子として機能することがわかってきた。本研究では、各種疾患治療薬の標的受容体として幅広く研究が展開されているGPCRに着目し、『GPCR-Aを介した安全かつ有効な新規骨再生治療法の開発』を研究の全体構想として掲げ、『骨芽細胞に存在する転写ネットワークを解明し、最新のRNA工学を応用して唾液腺由来の核酸を用いて骨形成を負に制御する因子にブレーキをかけ、顎骨・歯槽骨再生を目指す新規骨再生核酸医療を探索する』ことを本研究の目標としている。現在までの得られて結果としては、培養骨芽細胞（MC3T3-E1細胞）にBMP-2およびGPCRアゴニストを作用させ、24、48、72時間後にtotal RNAを抽出し、抽出したRNAをPolyAセレクションと限定分解を行って、2段階のcDNAの合成の後、両端にアダプター配列を付加してPCR増幅を行って鋳型を作製し、この鋳型に対してシークエンスを行った（イルミナHiseq 2500）。シークエンスされた鋳型由来のタグ配列の出力データをUSCS Genome Browserのレファレンス配列にマッピングし、マッピングされたタグ配列の断片数をカウントして遺伝子長で補正した値（単位はFPKM: fragment per kilobase of exon per million mapped read）を転写産物発現量として算出し解析を行ったところ、新規骨形成療法のおいて候補となる転写産物が約1000個同定された。現在は得られて候補転写産物の絞り込みを行っている。また、別の実験系としてGPCRクラスAとして知られるプリン受容体のなかでP2X7およびP2X4に焦点をあてて、マウス唾液腺（顎下腺）での発現と、2型糖尿病病態下における発現変化について詳細な検討を行い、結果を学会発表する予定である（第82回日本矯正歯科学会学術大会、新潟2023年11月）。

The co-service capacitive body (GPCR) was used to control the GPCR drug A (GPCR-A) and the bone formation inhibitor (BIF). In this study, the recipients of various diseases and diseases were studied, and the results of the GPCR study, the introduction of GPCR-A, the introduction of new methods for bone regeneration and the treatment of bone regeneration were carried out in this study. in this study, the recipients of various kinds of diseases and diseases were studied. The latest RNA engineering research is based on the origin of salivary glands, nucleic acid, bone formation, bone formation, bone regeneration, bone regeneration, bone regeneration and bone regeneration. At present, the results of the experiment show that the effects of BMP-2, MC3T3-E1, total RNA, total RNA, RNA, PolyA, PolyA, and so on are effective. After 24, 48, 72 hours, the total RNA extraction is performed, the RNA is extracted, and the decomposition is limited. After the synthesis of 2-segment cDNA, the terminal terminal is equipped with a series of operators to increase the size of the PCR. Type I