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肝の脂肪化における血清コリンエステラーゼ活性上昇とその性状

肝脏脂肪变性血清胆碱酯酶活性升高及其特征

基本信息

批准号：
20K10456
负责人：
平田幸代
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Nippon Medical School
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K10456/
关键词：
コリンエステラーゼ Sandwich ELISA オレイン酸 DELFIA 脂肪肝

项目摘要

①血清ChEのSandwich ELISAの再現性、安定性、感度の向上:昨年度に引き続き、DELFIAを用いた測定法についてさらに検討を行った。バックグラウンドの低い蛍光用マイクロプレートを採用し、時間分解蛍光の測定条件を変更することで再現性や安定性が改善したものの、感度はテトラメチルベンジジンによる発色のELISAと比べ２倍程度であり、大きく向上させることはできなかった。②In vitroの脂肪肝モデルを用いた脂肪蓄積量とChEとの関連性の検討:１）OAの濃度変化における脂肪蓄積量への影響：HuH-7細胞をカルチャーカバーガラスへ播種し、OA添加24時間後に固定し、Oil Red O溶液およびヘマトキシリン溶液で染色した。OA濃度の上昇に伴い、脂肪滴が大きくなり、数も増加した。画像解析により細胞当たりの脂肪滴の面積を比較したところ、OA濃度の上昇に伴い細胞当たりの脂肪滴の面積は増加し、今回添加したOAの最大濃度である0.6mMは0mMの約74倍であった。２）OAの濃度変化によるChE発現および抗原量への影響：HuH-7細胞を48wellプレートへ播種し、24時間後に種々の濃度でOAを添加し、添加後9日目と12日目にtotal RNAおよび培養上清を採取した。RT-PCRによりG3PDHをコントロールとしてChEのmRNA量およびChE抗原量の測定を行ったところ、OA濃度の上昇に伴い、ChEのmRNA量、培養上清中のChE抗原量はともに増加傾向を示した。以上の結果から、OA添加による脂肪蓄積の上昇とChE抗原量および発現量は正の相関性が見られ、OAによる脂肪の産生あるいは蓄積とChEには関連がある可能性が考えられた。

1. The reproducibility, stability and sensitivity of Sandwich ELISA for serum ChE were studied by using the method of DELFIA and DELFIA in the past year. The reproducibility, stability and sensitivity of the ELISA were improved by changing the measurement conditions of the time-resolved fluorescence. The color of the ELISA was twice as high as that of the ELISA. (2) The relationship between fat accumulation and ChE In vitro fatty liver:1) The effect of OA concentration on fat accumulation: HuH-7 cells were seeded, OA was added 24 hours later, oil red O solution was fixed, and Oil Red O solution was stained. OA concentration increases, fat drops increase, and the number increases. The increase in OA concentration was accompanied by an increase in the area of fat droplets in cells, and the maximum concentration of OA was approximately 74 times greater than 0 mM. 2) The effect of OA concentration on ChE production and antigen quantity: HuH-7 cells were seeded at 48well, 24 hours after seeding, OA concentration was added, total RNA was collected at 9 to 12 days after addition, and culture supernatant was collected. RT-PCR showed that the amount of ChE mRNA and ChE antigen in culture supernatant increased with the increase of OA concentration. The above results show that the increase of fat accumulation due to OA addition and the positive correlation between the amount of ChE antigen and the amount of ChE antigen are related to the possibility of fat accumulation due to OA addition.