減数分裂期交叉型組換えの選択機構の解明

減数分裂期における交叉型組換え経路選択の仕組みを明らかにするために、組換えDNA合成に関与することが想定されるタンパク質の抗体を作製し、免疫染色により減数分裂期の細胞における局在を検証した。その結果、相同染色体が対合する領域に特異的に局在が観察された。これは、組換えDNA合成と相同染色体間の対合が関連するという、目的遺伝子のノックアウトマウスの解析から得られた結果と一致する。また、減数分裂組換えにおける組換えDNA合成を多角的に検証するために、阻害剤を加えて減数分裂期の細胞をex vivoで培養し、解析を行った。その結果、DSB修復の遅延、及び、交叉型組換え部位に結合するMLH1のfoci数の減少が見られた。このことは、組換えDNA合成がDSB修復及び交叉型組換えの形成に極めて重要であることを示唆する。昨年度実施したRAD51リコンビナーゼに対するChIP-seq (SSDS; Single-stranded DNA sequenicing) データを解析した結果、先行研究と比較して減数分裂組換えホットスポット以外への弱い結合が多く検出されたが、強い組換えホットスポットに顕著なRAD51の結合が確認された。今後変異体解析などで使用可能な実験系として確立できたと考えられる。

減数分裂期における交叉型組換え経路選択の仕組みを明らかにするために、組換えDNA合成に関与することが想定されるタンパク質の抗体を作製し、免疫染色により減数分裂期の細胞における局在を検証した。その結果、相同染色体が対合する領域に特異的に局在が観察された。これは、組換えDNA合成と相同染色体間の対合が関連するという、目的遺伝子のノックアウトマウスの解析から得られた結果と一致する。また、減数分裂組換えにおける組換えDNA合成を多角的に検証するために、阻害剤を加えて減数分裂期の細胞をex vivoで培養し、解析を行った。その結果、DSB修復の遅延、及び、交叉型組換え部位に結合するMLH1のfoci数の減少が見られた。このことは、組換えDNA合成がDSB修復及び交叉型組換えの形成に極めて重要であることを示唆する。昨年度実施したRAD51リコンビナーゼに対するChIP-seq (SSDS; Single-stranded DNA sequenicing) データを解析した結果、先行研究と比較して減数分裂組換えホットスポット以外への弱い結合が多く検出されたが、強い組換えホットスポットに顕著なRAD51の結合が確認された。今後変異体解析などで使用可能な実験系として確立できたと考えられる。