分子シャペロン遺伝子の発現リズムの破綻が肝臓に異常を引き起こすしくみ

分子伴侣基因表达节律的破坏如何导致肝脏异常

• 批准号: 20K15841
• 负责人: 北條 広朗
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2021-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K15841/
• 关键词: 概日リズム; エンハンサー; シャペロン; マウス; 代謝

概日時計は生体恒常性の維持に必須の分子機構であり、多くの疾患で概日時計の異常 (多数の遺伝子の発現リズムの異常) が観察される。ところがこれまで、「どの」遺伝子のリズムの異常が疾患に重要かを同定することは技術的に困難であった。本研究では、エンハンサー遺伝学を活用してこの課題を解決しようと試みた。本研究では標的遺伝子を肝臓で発現するシャペロン遺伝子とし、本遺伝子のエンハンサーを同定した。次にCrispr/Cas9システムを利用して、本エンハンサーを欠失させたマウスを作製した。本マウスの肝臓における標的シャペロン遺伝子の発現リズムを解析するため、一日を3時間おきに区切りマウス肝臓を採取しリアルタイムPCRおよびウェスタンブロッティングを行った。その結果、mRNAレベル、タンパク質レベルで当該遺伝子の発現リズムがほぼ完全に消失していることが判明した。一方、本マウスの肝臓において種々の時計遺伝子の発現リズムは影響を受けていないことが確かめられた。つまり、エンハンサーのノックアウトという全く新しいアプローチによって、マウス肝臓において単一遺伝子のみのリズムを破たんさせることに成功した。そこで、本シャペロンの標的タンパク質の肝臓における発現リズムの解析を行い、プロテオームレベルでの影響を明らかにした。これらの結果を培養細胞でのノックダウン実験、および本シャペロン自体の遺伝子ノックアウトマウスの解析により検証した。また本マウスの行動リズムの解析を行った。現在、本マウスの肝臓における代謝解析、表現型の解析を進行中である。

In order to maintain the maintenance of physical constancy, it is necessary to check the molecular mechanism and the general daily schedule of multiple diseases (most of the children have found that they are not normal). In order to meet the needs of people who are suffering from diseases and diseases, they are also very important in determining the difficulties and difficulties of the technology of medical treatment. The purpose of this study is to learn how to make use of the project to solve the problem and try to solve the problem. In this study, the children of the first two years of the study, the liver, the liver and the liver of this study. This is the first time that you make use of the Crispr/Cas9 information. This is the best way to make sure that you are not in good condition. In this hospital, you can use the computer to analyze the computer, and then cut the PCR in the morning three hours a day. You can get the correct information from the computer. The results, the mRNA results, the results and the results. On the other hand, we do not know if you are going to have a problem with all kinds of time statistics. You will be affected by the information you have received. Please tell me that the whole thing is new. I don't know. I don't know. I don't know what to do. In this case, please tell me that you are aware of the problem and that you will be able to understand the situation. The results of this study are as follows: do you want to know how to do this? the results are as follows: in the end, the results show that the cells are not in good health, and this is the case. This is the only way to analyze the behavior of the bank. At present, we are in the process of liver analysis and table analysis.