Pile-up型増殖に着目した新規肝細胞培養法確立および肝がん治療化合物の探索

建立以堆积增殖为重点的新型肝细胞培养方法并寻找肝癌治疗化合物

• 批准号: 20K16226
• 负责人: 宇留島 隼人
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Osaka Metropolitan University (2022)Osaka City University (2020-2021)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K16226/
• 关键词: 肝細胞; アルブミン; 肝細胞がん; 腫瘍悪性度; 肝細胞培養; Pile-up

肝細胞は一般的な上皮細胞と異なり基底膜に裏打ちされていない組織学的特徴を有する。したがって、基底膜に接した単層平面的な形態ではなく、基底膜に依らない肝細胞同士の接着による重層状構造を形成すると考えられ、この立体構造による細胞極性の獲得こそが肝細胞特異的機能の発揮に必要であると考えられる。2020年度に申請者はヒト肝がん細胞株HepG2細胞に重層増殖タイプ（Pile-up型）と平面単層増殖タイプ（Flat型）が混在することに気付き、それぞれをクローニングしたところFlat型に比べてPile up型の方がアルブミン合成能が顕著に高かった。我々はその中の一つの遺伝子Aに着目した。Pile up型HepG2細胞の遺伝子Aをノックダウンしたところアルブミンの合成能が５０％以上減弱した。2021年度はFlat型からPile-up型へと形態を変化させる化合物の探索を試みた。大阪大学薬学部が有するFDA承認化合物1134種類の化合物ライブラリーを用いてスクリーニングを行った。ヒットした化合物は形態変化のみならず、HepG2細胞におけるアルブミン合成能を増強した。またマウスから単離した初代培養肝細胞に対しても同じ効果が見られた。そのメカニズムの一つとしてアルブミン発現に関わる転写因子の一つが増強が関与していることが示唆された。2022年度は「Flat type」と「ヒット化合物を添加したFlat type」との比較をRNA-seqで行い、どのようなpathwayが動いているのかを検証した。また培養法を通常の接着培養ではなく浮遊培養で行うことでアルブミン産生能がより増強されることを見出した。このRNA-seqにおいても2021年度に見出していた転写因子の増強が確認できた。したがって、このヒット化合物はアルブミン特異的転写因子発現の増強を介してアルブミンの発現を増加させていることが示唆された。

Hepatocytes have histologic characteristics similar to those of normal epithelial cells and basement membranes. The morphology of the basal membrane and the monolayer plane of the basement membrane are necessary for the development of the specific functions of hepatocytes. In 2020, the applicant applied for HepG2 cell line, which is composed of multiple layers (Pile-up type) and Flat layers (Flat type), and the synthetic energy is higher than that of Pile-up type. I'm not going to be able to do that. The synthesis of gene A in pile-up HepG2 cells was reduced by more than 50%. In 2021, the Flat type, the Pile-up type and the chemical form were changed. The Department of Pharmacy of Osaka University has approved the use of compound 1134 as a compound. The morphological changes of the compounds were observed and the synthesis ability of HepG2 cells was enhanced. The results of primary culture of liver cells were analyzed. The first time a user enters a computer, the second time a user enters a computer, the third time a user enters a computer, the fourth time a computer, the fourth time a user enters a computer, the computer, the fourth time a user enters a computer, the computer, the fourth time a user enters a computer, the computer, the fourth time a user enters a computer, the computer, the fourth time a computer, the user enters a computer, the computer, the fourth time a computer, the user enters a computer. In 2022, the comparison between "Flat type" and "compound addition" Flat type "was conducted by RNA-seq, and the pathway was verified. The culture method is usually followed by floating culture, which produces energy. This RNA-seq was confirmed in 2021 when the increase in the writing factor was observed. The results showed that the increase of the expression of the anti-tumor factors was related to the increase of the expression of the anti-tumor factors.

项目成果

肝星細胞の活性化時における上皮ー間葉転換と機能変化との相関

肝星状细胞活化过程中上皮间质转化与功能变化的相关性

• 发表时间: 2021
• 作者: 西田叶;木下遼;鯵坂裕美;氣駕恒太朗;柴山恵吾;宇留島隼人 和氣健二郎 湯浅秀人 松原勤 池田一雄
• 通讯作者: 宇留島隼人 和氣健二郎 湯浅秀人 松原勤 池田一雄

肝星細胞と肝実質細胞との相関関係

肝星状细胞与肝实质细胞的相关性

• 发表时间: 2021
• 作者: 和氣健二郎;宇留島隼人;湯浅秀人;松原勤;池田一雄
• 通讯作者: 池田一雄

Cancer cells produce liver metastasis via gap formation in sinusoidal endothelial cells through proinflammatory paracrine mechanisms.

• DOI: 10.1126/sciadv.abo5525
• 发表时间: 2022-09-30
• 期刊: Science advances
• 影响因子: 13.6

肝星細胞の微小突起形成におけるCdc42の役割について

Cdc42在肝星状细胞微突起形成中的作用

• 发表时间: 2022
• 作者: 湯浅秀人;宇留島隼人;松原勤;池田一雄
• 通讯作者: 池田一雄

上皮－間葉転換に着目した新規肝星細胞脱活性化候補化合物の探索

寻找新型肝星状细胞失活候选化合物，重点关注上皮间质转化

• 发表时间: 2021
• 作者: Shiokawa Daisuke;Sakai Hiroaki;Ohata Hirokazu;Miyazaki Toshiaki;Kanda Yusuke;Sekine Shigeki;Narushima Daichi;Hosokawa Masahito;Kato Mamoru;Suzuki Yutaka;Takeyama Haruko;Kambara Hideki;Nakagama Hitoshi;Okamoto Koji;宇留島隼人 松原勤 湯浅秀人 和氣健二郎 池田一雄
• 通讯作者: 宇留島隼人 松原勤 湯浅秀人 和氣健二郎 池田一雄