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腸管出血性大腸菌の宿主感染ステージに応じた小分子RNAによる病原性発現制御の解明

阐明小RNA对肠出血性大肠杆菌致病性表达的调节取决于宿主感染阶段

基本信息

批准号：
20K16248
负责人：
須藤直樹
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kyorin University (2022)Kitasato University (2020-2021)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K16248/
关键词：
腸管出血性大腸菌小分子RNA 転写後制御 ler LEE 転写後発現制御病原性発現

项目摘要

本研究課題は腸管出血性大腸菌(EHEC)の宿主細胞接着の各段階における、病原性遺伝子群LEEの転写調節因子Lerの転写後制御を担う小分子RNA(以下、 sRNA)の同定とその役割の解明を試みるものである。2022年度は、(A)昨年度に同定したler mRNAに結合する2つのsRNA(以下、X sRNA、及びY　sRNAとする。)の機能解析と、(B)宿主細胞接着の各段階におけるのトランスクリプトームの解析をおこなった。(A) X、またはY sRNAを過剰発現させた株ではlerの発現量が減少し、さらにLerが制御するLEEの発現量も減少した。さらに、同じ株を用いて宿主細胞への接着性を解析した結果、接着性の低下も見られた。これらの結果はXとYがlerの発現抑制を介して、宿主細胞への接着を抑制する因子であることを示す。加えて、X sRNAについてはler mRNAとの塩基対形成領域を変異解析から同定し、さらにX sRNAの発現が低栄養培地で上昇することを明らかにした。(B) EHECはHeLa細胞と共に培養すると、概ね接着後4時間で細胞表面にマイクロコロニーの形成が始まり、接着後7時間で細胞表面の大部分を覆う。この宿主感染ステージに着目しHeLa細胞への接着後4時間、及び7時間におけるHeLa細胞に接着したEHEC、または非接着のEHECのトランスクリプトームを取得した。HeLa細胞に非接着と接着のEHECのトランスクリプトームを主成分分析で解析したところ、有意に遺伝子発現パターンが異なること、LEEの発現が接着EHECで上昇していることを明らかにした。またsRNAの発現に関して解析した結果、X sRNAは非接着より接着で、また4時間培養より7時間培養で発現が上昇することがわかった。この結果はEHECの宿主感染ステージに応じたsRNAの発現変動をとらえた最初の例である。

This study focused on the regulation of Ler, a post-transcriptional regulatory factor of pathogenic gene subgroup LEE, and the identification of small RNA (sRNA) in host cells of enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC). In 2022,(A) the same time as last year, the sRNA(X sRNA, and Y sRNA) was combined. (B) Analysis of the host cell's subsequent stages. (A)X, Y, S, R, R. The results of adhesion analysis of host cells in the same strain are as follows: The result is that the expression of X and Y molecules is inhibited by the expression of X and Y molecules. The expression of X-sRNA in the expression of XsRNA in the expression (B)When EHEC co-cultured HeLa cells, the formation of mucronin on the cell surface began approximately 4 hours later, and most of the cell surface was covered approximately 7 hours later. The host infection occurred at 4 and 7 hours after HeLa cell inoculation, and the host infection occurred at 7 hours after HeLa cell inoculation. HeLa cells are not connected to the EHEC, but the principal component analysis shows that the occurrence of LEE is different from that of EHEC. The results of analysis of sRNA expression showed that sRNA expression increased after 4-hour incubation. The result is that EHEC infection occurs in the first instance.

项目成果

期刊论文数量（9）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Fatty Acid Homeostasis Tunes Flagellar Motility by Activating Phase 2 Flagellin Expression, Contributing to Salmonella Gut Colonization

DOI：
10.1128/iai.00184-22
发表时间：
2022-06
期刊：
Infection and Immunity
影响因子：
3.1
作者：
Y. Hoshino;Taro Sakamoto;Naoki Sudo;Masahiro Ito;Takeshi Haneda;N. Okada;T. Miki
通讯作者：
Y. Hoshino;Taro Sakamoto;Naoki Sudo;Masahiro Ito;Takeshi Haneda;N. Okada;T. Miki

合成致死スクリーニングから見出されたRNA結合タンパク質Hfq が関与する遺伝子発現制御機構の解析

通过合成致死筛选发现涉及RNA结合蛋白Hfq的基因表达控制机制分析

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
寺島楽;坂藤明音;須藤直樹;関根靖彦
通讯作者：
関根靖彦

小分子 RNA MicA による外膜ポリン PhoE の発現抑制とその生物学的意義

小RNA MicA对外膜孔蛋白PhoE表达的抑制及其生物学意义

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
須藤直樹;関根靖彦;岡田信彦
通讯作者：
岡田信彦

志賀毒素転換ファージにコードされる低分子RNAの機能解析

志贺毒素转化噬菌体编码的小RNA的功能分析

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
Suzuki Shugo;Cohen Samuel M.;Arnold Lora L.;Pennington Karen L.;Kato Hiroyuki;Naiki Taku;Naiki-Ito Aya;Yamashita Yoriko;Takahashi Satoru;酒井康弘，塚本徹哉，黒田誠，桑原一彦;清家総史，小林秀丈，髙橋栄造，岡本敬の介，山中浩泰;須藤直樹佐々木万里香今福拓也伊豫田淳岡田信彦
通讯作者：
須藤直樹佐々木万里香今福拓也伊豫田淳岡田信彦

腸管出血性大腸菌の病原性発現における転写後制御

肠出血性大肠杆菌毒力表达的转录后调控

DOI：
发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
0
作者：
Nishide Goro;Lim Keesiang;Mohamed Mahmoud Shaaban;Kobayashi Akiko;Hazawa Masaharu;Watanabe-Nakayama Takahiro;Kodera Noriyuki;Ando Toshio;Wong Richard W.;須藤直樹
通讯作者：
須藤直樹