腫瘍型糖鎖構造を保持する膜タンパク質に特異的結合する抗体探索と抗体医薬品開発
腫瘍型糖鎖構造を保持する膜タンパク質に特異的結合する抗体探索と抗体医薬品開発
寻找与保留肿瘤型糖链结构的膜蛋白特异性结合的抗体并开发抗体药物
批准号：
20K16322
负责人：
佐野 雅人
金额：
$2.66万
依托单位：
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2020
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
2020-04-01 至 2022-03-31
中文摘要
翻译
がん特異的糖鎖構造を形成するとリアルタイムPCRの解析結果より見込まれる神経膠芽腫の細胞株であるLN229にEGFRを強制発現させたLN229/EGFRを免疫原としてBalb/cマウス計10匹以上に免疫し、免疫したマウス脾臓を用いてハイブリドーマを作製し、Flow cytometoryによる抗体のスクリーニングおよびクローニングを行った。その結果200種類以上の抗EGFRモノクローナル抗体を樹立した。作製した200以上の抗EGFRモノクローナル抗体について、Flow cytometory、ウエスタンブロッティング法、および免疫組織化学染色法に有用であるかを各モノクローナル抗体について順次検討した。また、EGFRを発現している正常細胞株およびがん細胞株を用いてがん細胞株のみに反応する抗EGFRモノクローナル抗体についても順次探索した。抗EGFRモノクローナル抗体のエピトープについても4つあるEGFRドメインのうちどのドメインに結合するかを検討した。その結果、ドメインⅢに結合する抗体が最も多かったため、ドメインⅢに結合するエピトープの詳細な解析をタンパクを構成するアミノ酸の間に5つのアミノ酸RIEDLを挿入することでタンパク構造の一部を変化させエピトープを解析する新しいエピトープ解析手法REMAP法にて解析した。その結果、アラニン置換等の点変異導入ではわからなかった抗体のエピトープを解析することができた。
英文摘要
がん特異的糖鎖構造を形成するとリアルタイムPCRの解析結果より見込まれる神経膠芽腫の細胞株であるLN229にEGFRを強制発現させたLN229/EGFRを免疫原としてBalb/cマウス計10匹以上に免疫し、免疫したマウス脾臓を用いてハイブリドーマを作製し、Flow cytometoryによる抗体のスクリーニングおよびクローニングを行った。その結果200種類以上の抗EGFRモノクローナル抗体を樹立した。作製した200以上の抗EGFRモノクローナル抗体について、Flow cytometory、ウエスタンブロッティング法、および免疫組織化学染色法に有用であるかを各モノクローナル抗体について順次検討した。また、EGFRを発現している正常細胞株およびがん細胞株を用いてがん細胞株のみに反応する抗EGFRモノクローナル抗体についても順次探索した。抗EGFRモノクローナル抗体のエピトープについても4つあるEGFRドメインのうちどのドメインに結合するかを検討した。その結果、ドメインⅢに結合する抗体が最も多かったため、ドメインⅢに結合するエピトープの詳細な解析をタンパクを構成するアミノ酸の間に5つのアミノ酸RIEDLを挿入することでタンパク構造の一部を変化させエピトープを解析する新しいエピトープ解析手法REMAP法にて解析した。その結果、アラニン置換等の点変異導入ではわからなかった抗体のエピトープを解析することができた。
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会议论文
REMAP法を用いた抗EGFR抗体のエピトープ解析
使用 REMAP 方法进行抗 EGFR 抗体表位分析
使用 REMAP 方法进行抗 EGFR 抗体表位分析
DOI：
--
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
--
作者：
[Hosono H, Takei J, Ohishi T, Sano M, Asano T, Sayama Y, Nakamura T, Yanaka M, Kawada M, Harada H, Kaneko MK, Kato Y, 佐野 雅人]
通讯作者：
佐野 雅人
Defucosylated Anti-EGFR Monoclonal Antibody 134-mG2a-f Exerts Antitumor Activities in Mouse Xenograft Models of Dog EGFR-overexpressed Cells
去岩藻糖基化抗 EGFR 单克隆抗体 134-mG2a-f 在狗 EGFR 过表达细胞的小鼠异种移植模型中发挥抗肿瘤活性
去岩藻糖基化抗 EGFR 单克隆抗体 134-mG2a-f 在狗 EGFR 过表达细胞的小鼠异种移植模型中发挥抗肿瘤活性
DOI：
10.1089/mab.2021.0022
发表时间：
2021
期刊：
Monoclon. Antib. Immunodiagn. Immunother.
影响因子：
--
作者：
[Tateyama N, Nanamiya R, Ohishi T, Takei J, Nakamura T, Yanaka M, Hosono H, Saito M, Asano T, Tanaka T, Sano M, Kawada M, Kaneko MK, Kato Y.]
通讯作者：
Kato Y.
Epitope Mapping of an Anti-Human EGFR Monoclonal Antibody (EMab-51) using the REMAP Method
使用 REMAP 方法对抗人 EGFR 单克隆抗体 (EMab-51) 进行表位作图
使用 REMAP 方法对抗人 EGFR 单克隆抗体 (EMab-51) 进行表位作图
DOI：
10.1089/mab.2021.0010
发表时间：
2021
期刊：
Monoclon. Antib. Immunodiagn. Immunother.
影响因子：
--
作者：
[Nanamiya R, Sano M, Asano T, Yanaka M, Nakamura T, Saito M, Tanaka T, Hosono H, Tateyama N, Kaneko MK, Kato Y.]
通讯作者：
Kato Y.