腫瘍型糖鎖構造を保持する膜タンパク質に特異的結合する抗体探索と抗体医薬品開発

寻找与保留肿瘤型糖链结构的膜蛋白特异性结合的抗体并开发抗体药物

• 批准号: 20K16322
• 负责人: 佐野 雅人
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2022-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K16322/
• 关键词: EGFR; REMAP法; Antibody; 抗体; 腫瘍生物学

がん特異的糖鎖構造を形成するとリアルタイムPCRの解析結果より見込まれる神経膠芽腫の細胞株であるLN229にEGFRを強制発現させたLN229/EGFRを免疫原としてBalb/cマウス計10匹以上に免疫し、免疫したマウス脾臓を用いてハイブリドーマを作製し、Flow cytometoryによる抗体のスクリーニングおよびクローニングを行った。その結果200種類以上の抗EGFRモノクローナル抗体を樹立した。作製した200以上の抗EGFRモノクローナル抗体について、Flow cytometory、ウエスタンブロッティング法、および免疫組織化学染色法に有用であるかを各モノクローナル抗体について順次検討した。また、EGFRを発現している正常細胞株およびがん細胞株を用いてがん細胞株のみに反応する抗EGFRモノクローナル抗体についても順次探索した。抗EGFRモノクローナル抗体のエピトープについても4つあるEGFRドメインのうちどのドメインに結合するかを検討した。その結果、ドメインⅢに結合する抗体が最も多かったため、ドメインⅢに結合するエピトープの詳細な解析をタンパクを構成するアミノ酸の間に5つのアミノ酸RIEDLを挿入することでタンパク構造の一部を変化させエピトープを解析する新しいエピトープ解析手法REMAP法にて解析した。その結果、アラニン置換等の点変異導入ではわからなかった抗体のエピトープを解析することができた。

The results of PCR analysis showed that there were more than 10 EGFR-specific immunogens in LN229/EGFR cell line of glioma, and there were more than 10 EGFR-specific immunogens in LN229/EGFR cell line. More than 200 types of anti-EGFR antibodies have been established. To prepare more than 200 anti-EGFR antibodies, Flow cytometric, immunohistochemical staining, and immunohistochemical staining methods were used. The expression of EGFR in normal cell lines and normal cell lines was explored in turn by using anti-EGFR antibodies in cell lines. Anti-EGFR drugs can be used to detect EGFR receptor binding. The results show that the antibody binding to the antibody is the most common, and the binding to the antibody is the most common. The detailed analysis of the antibody binding to the antibody is the composition of the antibody binding to the antibody binding. The results of the study, such as the introduction of point differences, antibody analysis and so on

项目成果

REMAP法を用いた抗EGFR抗体のエピトープ解析

使用 REMAP 方法进行抗 EGFR 抗体表位分析

• 发表时间: 2021
• 作者: Hosono H;Takei J;Ohishi T;Sano M;Asano T;Sayama Y;Nakamura T;Yanaka M;Kawada M;Harada H;Kaneko MK;Kato Y;佐野 雅人
• 通讯作者: 佐野 雅人

Defucosylated Anti-EGFR Monoclonal Antibody 134-mG2a-f Exerts Antitumor Activities in Mouse Xenograft Models of Dog EGFR-overexpressed Cells

去岩藻糖基化抗 EGFR 单克隆抗体 134-mG2a-f 在狗 EGFR 过表达细胞的小鼠异种移植模型中发挥抗肿瘤活性

• DOI: 10.1089/mab.2021.0022
• 发表时间: 2021
• 期刊: Monoclon. Antib. Immunodiagn. Immunother.
• 作者: Tateyama N;Nanamiya R;Ohishi T;Takei J;Nakamura T;Yanaka M;Hosono H;Saito M;Asano T;Tanaka T;Sano M;Kawada M;Kaneko MK;Kato Y.
• 通讯作者: Kato Y.

Epitope Mapping of an Anti-Human EGFR Monoclonal Antibody (EMab-51) using the REMAP Method

使用 REMAP 方法对抗人 EGFR 单克隆抗体 (EMab-51) 进行表位作图

• DOI: 10.1089/mab.2021.0010
• 发表时间: 2021
• 期刊: Monoclon. Antib. Immunodiagn. Immunother.
• 作者: Nanamiya R;Sano M;Asano T;Yanaka M;Nakamura T;Saito M;Tanaka T;Hosono H;Tateyama N;Kaneko MK;Kato Y.
• 通讯作者: Kato Y.