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腎細胞癌におけるMicroRNA-204-5pおよびTRPM3の機能解析

MicroRNA-204-5p和TRPM3在肾细胞癌中的功能分析

基本信息

批准号：
20K16450
负责人：
倉橋竜磨
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K16450/
关键词：
腎癌 miRNA-204 TFE3 転座型腎癌 micro-RNA micro RNA TRPM

项目摘要

ヒト近位尿細管HK2細胞で融合TFE3(PRCC-TFE3)のドキシサイクリン依存的発現誘導細胞株を作製し、PRCC-TFE3が恒常活性型の転写因子として働き、標的遺伝子の発現を亢進させることを見出し報告してきた。また、PRCC-TFE3がTRPM3とmiR-204-5pの発現を誘導していることが示唆されていた。そこで融合TFE3(PRCC-TFE3)のドキシサイクリン依存的発現誘導細胞株を用い、PRCC-TFE3に対するクロマチン免疫沈降シーケンシングを実施した。その結果、TRPM3のイントロン１内にPRCC-TFE3キメラタンパク質が結合する部位を３か所見出した。この為、TFE3結合配列に変異を導入してmiR-204-5pの遺伝子発現を抑制することは困難であることが予測された。そこで、miR-204-5p 自体に変異を導入する方針に変更した。融合TFE3(PRCC-TFE3)のドキシサイクリン依存的発現誘導細胞株を親株として、miR-204-5pを標的としたガイドRNAをデザインし、CRISPR/Cas9システムによりmiR-204-5pをノックアウトした細胞株を複数株樹立し、解析を進めている。

The HK2 cells of proximal urethral tubes were fused with TFE3 (PRCC-TFE3) cells, which are dependent on the cell lines, and the constant active cell lines of PRCC-TFE3 were used to write the factors. Please, PRCC-TFE3 TRPM3mm miR-2045p, please show that you are instigated to do so by showing that you are instigated. To fuse TFE3 (PRCC-TFE3) gene into the cell line that is dependent on each other, to use PRCC-TFE3 cell line, to induce immune deposition, to induce immune deposition, to induce immune response. The results showed that the results of TRPM3 test were compared with the results seen in the first part of the PRCC-TFE3 test. This is true, and the combination of TFE3 and column is configured to import the miR-204-5p subset to suppress the impact of health problems. In this case, miR-204-5p autologous computer system will be used to make sure that you have more information. Fusion of TFE3 (PRCC-TFE3) target cell lines, miR-204-5p cell lines, RNA cell lines, CRISPR/ Cas9 cells, miR-204-5p cell lines, miR-204-5p cell lines and multiple cell lines were cloned and analyzed.