膵癌organoidを用いた進行度特異的な遺伝子解析および診断マーカーの探索研究

使用胰腺癌类器官进行阶段特异性遗传分析和诊断标记物探索性研究

• 批准号: 20K16950
• 负责人: 角田 道彦
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Yamagata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K16950/
• 关键词: 膵癌; オルガノイド; Extra cellular vesicles; organoid

本研究は、超音波内視鏡ガイド下穿刺生検（EUS-FNA）検体由来の膵癌organoidを用いて遺伝子解析を行い、膵癌進行度に特異的な遺伝子変異を呈するのか、また得られた膵癌細胞と膵間葉系細胞との共培養によりorganoidを構築し、培地から回収したEV由来のmiRNAの発現に影響を与えるかを目的としている。EUS-FNA検体から膵癌organoidの樹立は安定的に行う事が可能であるが、検体採取量にも依存するため、樹立効率は68%であった。樹立した18検体の膵癌organoidと膵切除検体から樹立した正常膵管上皮organoid2検体の中から、正常膵管上皮organoid1検体と、膵癌organoid3検体を選択肢、初代培養と10継代培養したorganoid間で遺伝子変異が維持されるかを確認するために、comprehensive cancer panelで代表的な癌遺伝子について変異解析を行った。膵癌organoid3検体については、継代を経てもKRAS変異および他の癌遺伝子変異を安定的に保持する事が確認され、正常膵管上皮organoidでは膵癌に特徴的に発現する癌遺伝子変異を認めない事を確認した。organoid培地から回収した培地から超遠心機で既報のプロトコールと同様に遠心し、EVを回収した。NanoSightでEVの大きさと数の評価を行い、平均して1.0×1E6/ml個が2mlの培地から得られた。RNeasy Midi kit (QIAGEN)を用いて培地からexsosomal RNAを抽出し、Bioanalyser (Agilent)でsmall RNAの質的評価を行い、1.8-5.0 ng/ulのsmall RNAが抽出可能であった。

ガ は this study, ultrasound endoscopy イ ド puncture under raw 検 (EUS FNA 検 body origin の Cui carcinoma organoid を with い て heritage 伝 approximate analytical line を い, Cui carcinoma degree に な of specific 伝 sub - different を show す る の か, ま た have ら れ た Cui cancer と Cui mesenchymal cell と の trained に よ り organoid を constructing し, petty か ら The re-release of たEV is derived from the occurrence of <s:1> miRNA る, its influence を and える を を, and its objective are と と て る る る る. EUS FNA - 検 body か ら Cui carcinoma organoid の set は stable に doeth う が may で あ る が, 検 body take に も dependent す る た め, set up the working rate 68% は で あ っ た. Set し た 18 検 body の Cui carcinoma organoid と Cui excision 検 body か ら set し た Cui normal epithelial organoid2 検 body in の か ら, normal Cui epithelial organoid1 検 と, Cui carcinoma organoid3 検 body を sentaku limb, original cultivation と 10 継 generation し た organoid between で 伝 sub - different が d Hold さ れ る か を confirm す る た め に, comprehensive cancer panel で な carcinoma of representative 伝 son に つ い て line - different analytical を っ た. Cui carcinoma organoid3 検 body に つ い て は, 継 を 経 て も KRAS - different お よ び he survived 伝 の cancer - different を stable に keep す る が sure さ れ, normal Cui epithelial organoid で は に Cui carcinoma of 徴 に 発 now す る carcinoma heritage 伝 sub - different を recognize め な い を sure し た. Organoid petty か ら back 収 し た petty か ら long で all their efforts to both の プ ロ ト コ ー ル と with others に telecentric し, EV を back 収 し た. NanoSight で EV の big き さ と number の review 価 を い, average し て 1.0 x 1 e6 / ml が 2 ml の petty か ら have ら れ た. The RNeasy Midi kit (QIAGEN)を extracted <s:1> and Bioanalyser (Agilent)でsmall RNA samples using <s:1> て pedified らexsosomal RNAを for evaluation 価を and 価を, 1.8-5.0 ng/ul <s:1> small RNAが extraction may be であった.