IL-10発現アデノ随伴ウイルスベクターによる難治性呼吸器疾患の新規治療法開発

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肺線維症および肺気腫におけるIL-10の役割を解明するために、マウスモデルを用いて解析を行う実験を行っている。しかし、昨年度も新型コロナウイルス感染症の蔓延防止を図るため、当大学施設における動物実験は長期間制限された。そのため、実験に用いるウイルスベクターを研究室内で作製することに重きを置いた。IL-10発現AAVベクターの作製については、HEK293細胞を用いてウイルスベクターを増殖させ、塩化セシウム密度匂配遠心法で精製することにしている。近年では、HEK293細胞からウイルスを回収した後、カラムを用いてAAVベクターを抽出、精製できるキットも利用できるため、キットによるAAVベクターの作製も試みた。従来の塩化セシウム密度匂配遠心法と比べ、一度に作製できる量は多くはないが、簡便であり、短時間で作製は可能であった。この方法によるAAVベクターの遺伝子導入の評価については、GFP遺伝子を搭載したAAVベクターやルシフェラーゼ遺伝子を搭載したAAVベクターを作製し、2種類の呼吸器系由来細胞株（気道上皮細胞BEAS-2B、肺細胞MLE12細胞）に遺伝子導入を行い、蛍光や発光の測定装置で遺伝子導入効率を評価した。カラムを用いた方法でも従来の精製法と遜色のない遺伝子導入効率を示すことができた。