アポトーシス調整因子を標的とした非小細胞肺癌の新規治療法の開発～根治を目指して～

开发针对凋亡调节因子的非小细胞肺癌新治疗方法 - 力求彻底治愈 -

• 批准号: 20K17200
• 负责人: 中道 真仁
• 金额: $ 1.58万
• 依托单位: Nippon Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K17200/
• 关键词: 薬剤獲得耐性; アポトーシス; 非小細胞肺癌; 上皮成長因子受容体; Foxo3a; FOXO3a; 肺癌

本研究は、薬剤獲得体制との関連性が明確でない「アポトーシス(細胞死)」に着目した新しい視点から薬剤獲得耐性の分子病態メカニズムを解明し、根治を目 指す新規薬物療法を開発することが目的である。 ミトコンドリア経路を介したアポトーシスにおいてBCL-2ファミリータンパク質が重要な役割を果たすことが知られている。 ステップワイズ法を用いてEGFR-TKI(オシメルチニブ)に対する非小細胞肺癌細胞株PC9とH1975の薬剤耐性細胞を作成し、Cell viability assayにて薬剤感受性・IC50を測定し、耐性化を確認した。親細胞株と作成した耐性細胞を用いて、ERK、FOXO3a、BIMを含むアポトーシス関連因子のウェスタンブロッ トによるタンパク質発現解析を行い、ERKによりリン酸化されたFOXO3aが核外(細胞質)へ移行してMDM2によるユビキチン化により分解され、FOXO3aの転写活性が 抑制されることで、 BIMの発現が低下し、アポトーシス抵抗性となることを確認した。FOXO3aの核外への移行は、蛍光タンパク質GFPをつけた各細胞の作成とDAPIにてDNAを含む核染色を行い、蛍光顕微鏡にて観察・撮影して確認した。FOXO3a siRNAとレンチウイルスベクターを用いてFOXO3aとBIMの遺伝子組み換え(ノックダウン、ノッ クアウト、 オーバーエクスプレッション発現)細胞を作成し、BIMとアポトーシスの変化を確認した。 治療候補薬剤として、Debrafenib、Trametinib、Bortezomibを使用して、薬剤感受性を測定し、新規薬物療法の候補薬剤を同定している。

This study aims to clarify the relationship between drug acquisition system and cell death, and to clarify the molecular pathology of drug acquisition tolerance from a new perspective, and to develop new drug therapies for treatment. The main purpose of this paper is to provide a comprehensive analysis of BCL-2 and BCL-2. EGFR-TKI(EGFR-TKI) was used in the Cell viability assay to determine the sensitivity and tolerance of non-small cell lung cancer cell lines PC9 and H1975. Parent cell lines were established to tolerate cell proliferation, ERK, FOXO3a, BIM, and the expression of ERK, FOXO3a, and BIM was inhibited by extracellular (cytoplasmic) migration of MDM2, and the expression of FOXO 3a was reduced. The resistance of the disease is confirmed. The migration of FOXO3a to the outer nucleus was confirmed by fluorescence microscopy and DNA staining. FOXO3a siRNA and BIM gene subset were used to identify the expression of FOXO3a and BIM gene subset. Treatment candidates, Debrafenib, Trametinib, Bortezomib use, drug susceptibility determination, new drug therapy candidates are identified

项目成果

EGFR遺伝子変異陽性肺癌細胞株におけるosimertinibとpemetrexedの併用効果と分子メカニズムの検討

奥希替尼与培美曲塞联合治疗EGFR基因突变阳性肺癌细胞系的作用及分子机制研究

• 发表时间: 2021
• 作者: 高野 夏希;清家 正博;大森 美和子;福泉 彩;久金 翔;中道 真仁;菅野 哲平;松本 優;宮永 晃彦;久保田 馨;弦間 昭彦
• 通讯作者: 弦間 昭彦

AXL活性化を示すALK 阻害薬耐性肺癌に対するギルテリチニブによる新規治療戦略

使用 gilteritinib 治疗 ALK 抑制剂耐药肺癌的新型治疗策略显示 AXL 激活

• 发表时间: 2022
• 作者: 中道真仁;野呂林太郎;平尾真季子;松本優;宮永晃彦;久保田馨;清家正博
• 通讯作者: 清家正博

Inhibitory Effect of Cytoprotective Autophagy Against the Anticancer Activity of Tyrosine Kinase Inhibitors

细胞保护性自噬对酪氨酸激酶抑制剂抗癌活性的抑制作用

• DOI: 10.1272/manms.16.184
• 发表时间: 2020
• 期刊: Nihon Ika Daigaku Igakkai Zasshi
• 作者: Nakajima Wataru;Nakamichi Shinji;Suzuki Hidenori;Tanaka Nobuyuki
• 通讯作者: Tanaka Nobuyuki

P－19 EGFR 変異陽性非小細胞肺がんの EGFR-TKI 抵抗性に伴う SMAD6 過剰発現の分子機構の解析と治療への応用

P-19 EGFR突变阳性非小细胞肺癌SMAD6过表达与EGFR-TKI耐药相关的分子机制分析及其在治疗中的应用

• 发表时间: 2020
• 作者: Yoshida M;Fukano H;Suzuki M;Hoshino Y;宮崎 海 中嶋 亘・田中信之 中道真仁・清家正博
• 通讯作者: 宮崎 海 中嶋 亘・田中信之 中道真仁・清家正博

EGFR陽性肺癌に対するオシメルチニブ耐性後カルボプラチン+ペメトレキセド+アファチニブ併用の有効性

卡铂+培美曲塞+阿法替尼联合治疗奥希替尼耐药后EGFR阳性肺癌的疗效

• 发表时间: 2022
• 作者: 恩田 直美;中道 真仁;松本 優;宮永 晃彦;野呂 林太郎;清家 正博
• 通讯作者: 清家 正博