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傷害糸球体のポドサイトに作用する血小板分子CLEC-2の効果

血小板分子CLEC-2对损伤肾小球足细胞的影响

基本信息

批准号：
20K17257
负责人：
田中景子
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Okayama University (2021-2022)Tokai University (2020)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K17257/
关键词：
ポドサイト血小板 Podoplanin CLEC-2 腎臓

项目摘要

Podoplaninは腎糸球体ポドサイトの細胞膜に強く発現するが、その機能は不明である。Podoplaninの内因性結合分子は、血小板に発現するC-type lectin likereceptor-2（CLEC-2）である。正常時、ポドサイトは糸球体基底膜により血小板から隔絶されているが、基底膜傷害時に血小板や血漿中の可溶性CLEC-2がポドサイトに作用する事が考えられた。リコンビナントCLEC-2を作製し、in vitroおよびin vivo実験を行った。in vitro実験では、FcおよびFc-CLEC-2で培養ポドサイトを刺激する実験を行った。Fcコントロールに比較し、Fc-CLEC-2刺激では、ポドサイトのアクチン線維が減少し、細胞突起は収縮し、細胞接着能の低下と遊走能の向上をみとめた。また、Podoplaninとアクチン線維をつなぐ介在蛋白ERMの脱リン酸化をみとめた。in vivo実験のために、より小分子のStrepTagII-FLAGタグCLEC-2（約30kDa）の発現Vectorを作製し大量精製した。正常マウスに投与したところ、FLAG-CLEC-2の糸球体への接着を確認でき、糸球体のRNA解析でSerpine1の上昇をみとめ、電顕像でポドサイトの足突起の退縮をみとめた。糸球体LysateのWestern Blotと蛍光染色では、Ezrinの脱リン酸化をみとめた。以上より、血小板分子CLEC-2は、糸球体傷害時にポドサイトに発現するPodoplaninに結合し、介在蛋白Ezrinの脱リン酸化により、 Podoplaninからアクチンを乖離させ、アクチン線維の収縮を起こし、その結果ポドサイトは形態変化をおこし、遊走能を獲得することが明らかになった。

Podoplanin is a kidney spheroid that has a strong cell membrane, and its function is unknown. Podoplanin's endogenous binding molecule, platelet's C-type lectin likereceptor-2 (CLEC-2). Normally, the basal membrane of the spherical basement membrane is isolated by the platelet, and the basement membrane is damaged. The role of soluble CLEC-2 in platelets and plasma has been determined at this time.リコンビナントCLEC-2 is manufactured, in vitro and in vivo. In vitro 実験では, FcおよびFc-CLEC-2でcultured ポドサイトをstimulated する実験を行った. FcコントロールにComparisonし、Fc-CLEC-2stimulationでは、ポドサイトのアクチンThe line dimension is reduced, the cell protrusions are shrunk, the cell adhesion ability is decreased, and the migration ability is increased.また, Podoplanin とアクチン线dimensional をつなぐ in the protein ERM の dehydration acidification をみとめた. In vivo small molecule StrepTagII-FLAGタグCLEC-2 (approximately 30kDa) is produced by Vector and is refined in large quantities. Normal マウスにinvestment and したところ, FLAG-CLEC-2 の糸spherical へのthen をconfirmation でき, 糸spherical のRNA analysis of Serpine1's rise and fall, and the electrochemical analysis of Serpine1's foot protrusions and retreat. Isosphere Lysate's Western Blot and light staining, Ezrin's acidification and desaturation. The above より, platelet molecule CLEC-2 は, にポドサイトに発appears するPodoplanin にbinding when the sphere is damaged, intervening protein Ezrin の dehydration acidification により, Podoplaninからアクチンをdeviationさせ、アクチン线dimensionalの shrinkageを出こし、そThe results of the change of the shape of the ポドサイトは form change をおこし, the wandering ability することが明らかになった.