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傷害糸球体のポドサイトに作用する血小板分子CLEC-2の効果

血小板分子CLEC-2对损伤肾小球足细胞的影响

基本信息

批准号：
20K17257
负责人：
田中景子
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Okayama University (2021-2022)Tokai University (2020)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K17257/
关键词：
ポドサイト血小板 Podoplanin CLEC-2 腎臓

项目摘要

Podoplaninは腎糸球体ポドサイトの細胞膜に強く発現するが、その機能は不明である。Podoplaninの内因性結合分子は、血小板に発現するC-type lectin likereceptor-2（CLEC-2）である。正常時、ポドサイトは糸球体基底膜により血小板から隔絶されているが、基底膜傷害時に血小板や血漿中の可溶性CLEC-2がポドサイトに作用する事が考えられた。リコンビナントCLEC-2を作製し、in vitroおよびin vivo実験を行った。in vitro実験では、FcおよびFc-CLEC-2で培養ポドサイトを刺激する実験を行った。Fcコントロールに比較し、Fc-CLEC-2刺激では、ポドサイトのアクチン線維が減少し、細胞突起は収縮し、細胞接着能の低下と遊走能の向上をみとめた。また、Podoplaninとアクチン線維をつなぐ介在蛋白ERMの脱リン酸化をみとめた。in vivo実験のために、より小分子のStrepTagII-FLAGタグCLEC-2（約30kDa）の発現Vectorを作製し大量精製した。正常マウスに投与したところ、FLAG-CLEC-2の糸球体への接着を確認でき、糸球体のRNA解析でSerpine1の上昇をみとめ、電顕像でポドサイトの足突起の退縮をみとめた。糸球体LysateのWestern Blotと蛍光染色では、Ezrinの脱リン酸化をみとめた。以上より、血小板分子CLEC-2は、糸球体傷害時にポドサイトに発現するPodoplaninに結合し、介在蛋白Ezrinの脱リン酸化により、 Podoplaninからアクチンを乖離させ、アクチン線維の収縮を起こし、その結果ポドサイトは形態変化をおこし、遊走能を獲得することが明らかになった。

Podoplanin is strongly expressed in the cell membrane of the kidney spheroid, and its function is unknown. The endogenous binding molecule of Podoplanin is C-type lectin receptor-2 (CLEC-2), which is produced in platelets. The role of soluble CLEC-2 in platelet plasma during basal membrane injury was examined. CLEC-2 is controlled, in vitro and in vivo. Fc-CLEC-2 is a culture medium. Fc-CLEC-2 stimulation reduces cell dimensions, cell processes shrink, cell adhesion decreases, and cell migration increases. Podoplanin is the most important protein in the protein family. StrepTagII-FLAG-CLEC-2 (about 30kDa) was produced and purified in large quantities. Normal Spheroids and Flag-CLEC-2 Spheroids Spherical Lysate and Western Blot The platelet molecule CLEC-2 binds to Podoplanin, mediates in the deacidification of Ezrin, separates Podoplanin from Ezrin, reduces the length of the protein, and as a result, becomes morphologically active and migrates.