A development of a gene mutations-targeted novel therapy in malignant lymphoma

恶性淋巴瘤基因突变靶向新疗法的开发

• 批准号: 20K17409
• 负责人: 川井 英嗣
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Tokai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K17409/
• 关键词: KMT2D; SRPK1; UTX; STK3; B細胞リンパ腫; p300/CBP; 合成致死; CRISPR/Cas9

COMPASS複合体を形成するKMT2D、UTXに対する合成致死遺伝子を同定し、治療につなげることが本研究の目的である。悪性リンパ腫または多発性骨髄腫細胞株にcas9を発現させた後、各遺伝子のノックアウト細胞(KO)を作成した。CRISPR/Cas9系を利用し、19000以上の遺伝子を網羅するレンチウイルスライブラリーを野生型およびKO型に感染させた。DNAを回収し、次世代シーケンサーを用いて解析し、リード数を比較した。KMT2Dについては、RNAシーケンスの結果を合わせ、279遺伝子をピックアップした。阻害剤がある遺伝子を選び、実際に阻害剤のIC50を比較した。KMT2D-WT型と、KO型において、阻害剤のIC50を比較し、SRPK1阻害剤で2群間で有意差がみられた。in vitroでの薬剤感受性、細胞増殖をみる実験から、SRPK1阻害剤を暴露させると、KMT2D-KO型でより効果が表れた。次に、SRPK1の3種類のsgRNAを含むウイルス液をそれぞれ作成し、KMT2D-WT型と、KO型細胞にそれぞれ感染させた。KMT2D-KO型細胞では、WTと比較し、明らかに細胞増殖能が抑制された。

COMPASS complex formation, KMT2D, UTX, synthetic lethal gene identification, treatment, and the purpose of this study After the development of cas9, the cells of various genes (KO) were produced. CRISPR/Cas9 has been used to detect more than 19000 genes, including wild-type and KO infections. The next generation of DNA was analyzed and compared KMT2D The IC50 of the resistance agent is compared with the IC50 of the resistance agent. KMT2D-WT type, KO type, IC50 of the inhibitor, SRPK1 inhibitor, 2 groups, intentional difference In vitro, the sensitivity, cell proliferation, SRPK1 inhibitor exposure, and KMT2D-KO effect are shown. In addition, SRPK1 and its three types of sgRNA were used to prepare and infect KMT2D-WT and KO cells. KMT2D-KO cells can inhibit the proliferation of KMT2D-KO cells compared with WT cells.