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新規バイオアッセイ法を用いたグルカゴン及びグルカゴン関連ペプチドの生理活性の評価

使用新的生物测定方法评估胰高血糖素和胰高血糖素相关肽的生理活性

基本信息

批准号：
20K17488
负责人：
柳町剛司
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Shiga University of Medical Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K17488/
关键词：
グルカゴンオキシントモジュリン

项目摘要

これまでに申請者は、グルカゴンがDPP-4及びNeprilycin（NEP）によって不活化されるが、オキシントモジュリン（OXM）はNEPによって不活化されないことを確認している。OXMはN末端から29個のアミノ酸配列がグルカゴンと同じで、C末端側に8個のアミノ酸が延長した37個のアミノ酸から成るホルモンで、グルカゴンと非常に類似した構造を有する。そこで、このOXMがNEP存在下ではどのような影響を受けているのかについて、LC-MS/MSを用いて詳細な検討を行った。まず最初にNEP存在下でのグルカゴンのLC-MS/MSを行った。NEP存在下でグルカゴンは大きく3つのピークが確認され、そのうちの1つを更に詳細に分析すると、3つのピークが確認され、NEPによってグルカゴンは計5つの分解産物が存在することが明らかになった。OXMもグルカゴンと同様にNEP存在下での検討を行うと、大きなピークが1つのみ確認できた。更に分析すると、分子量が184.12減少したペプチドに変換されたことが明らかとなった。OXMがNEPによって生成されるペプチドの構造を推定すると、OXM（1-37）のC末端側の2つのアミノ酸が欠失したOXM（1-35）が生成されることが推定された。そこでOXM（1-35）を合成し、LC-MS/MSで確認すると、NEP存在下でのOXM（1-37）の分解産物と、合成したOXM（1-35）のピークが一致することを確認した。OXMはグルカゴン/GLP-1のdual agonistであるとの報告があるため、OXM（1-35）の受容体活性をin vitroで確認すると、OXM（1-35）はOXM（1-37）とほぼ同等のグルカゴン及ぶGLP-1受容体活性を有していた。今後はin vivoでOXM（1-35）がどのような生理作用を有しているのか検討する予定である。

The applicant was asked to confirm that DPP-4 and Neprimycin (NEP) were inactivated by the NEP and that OXM was inactivated by NEP. OXM has a very similar structure to that of the 29-acid sequence on the N-terminal side and the 8-acid sequence on the C-terminal side. In the presence of NEP, OXM and LC-MS can be used for detailed analysis. Initially, the LC-MS/MS model was developed in the presence of NEP. In the presence of NEP, the decomposition products of NEP can be identified in more detail. OXM In addition, the molecular weight was reduced to 184.12. The structure of OXM was estimated to be generated by NEP, and the structure of OXM (1-37) was estimated to be generated by OXM (1-35). The synthesis of OXM (1-35) was confirmed by LC-MS/MS, and the decomposition products of OXM (1-37) were confirmed by synthesis of OXM (1-35). OXM reports on the dual agonist of OXM/GLP-1, the receptor activity of OXM (1-35) is confirmed in vitro, the equivalent receptor activity of OXM (1 - 35) is confirmed in OXM (1-37), and GLP-1 receptor activity is confirmed. In the future, OXM (1-35) will have a physiological function in vivo.