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新規バイオアッセイ法を用いたグルカゴン及びグルカゴン関連ペプチドの生理活性の評価

使用新的生物测定方法评估胰高血糖素和胰高血糖素相关肽的生理活性

基本信息

批准号：
20K17488
负责人：
柳町剛司
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Shiga University of Medical Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K17488/
关键词：
グルカゴンオキシントモジュリン

项目摘要

これまでに申請者は、グルカゴンがDPP-4及びNeprilycin（NEP）によって不活化されるが、オキシントモジュリン（OXM）はNEPによって不活化されないことを確認している。OXMはN末端から29個のアミノ酸配列がグルカゴンと同じで、C末端側に8個のアミノ酸が延長した37個のアミノ酸から成るホルモンで、グルカゴンと非常に類似した構造を有する。そこで、このOXMがNEP存在下ではどのような影響を受けているのかについて、LC-MS/MSを用いて詳細な検討を行った。まず最初にNEP存在下でのグルカゴンのLC-MS/MSを行った。NEP存在下でグルカゴンは大きく3つのピークが確認され、そのうちの1つを更に詳細に分析すると、3つのピークが確認され、NEPによってグルカゴンは計5つの分解産物が存在することが明らかになった。OXMもグルカゴンと同様にNEP存在下での検討を行うと、大きなピークが1つのみ確認できた。更に分析すると、分子量が184.12減少したペプチドに変換されたことが明らかとなった。OXMがNEPによって生成されるペプチドの構造を推定すると、OXM（1-37）のC末端側の2つのアミノ酸が欠失したOXM（1-35）が生成されることが推定された。そこでOXM（1-35）を合成し、LC-MS/MSで確認すると、NEP存在下でのOXM（1-37）の分解産物と、合成したOXM（1-35）のピークが一致することを確認した。OXMはグルカゴン/GLP-1のdual agonistであるとの報告があるため、OXM（1-35）の受容体活性をin vitroで確認すると、OXM（1-35）はOXM（1-37）とほぼ同等のグルカゴン及ぶGLP-1受容体活性を有していた。今後はin vivoでOXM（1-35）がどのような生理作用を有しているのか検討する予定である。

これまでにApplicant は, グルカゴンがDPP-4 and びNeprilycin (NEP) によって are not activatedされるが、オキシントモジュリン（OXM）はNEPによって不activatedされないことをconfirmationしている. OXM's N-terminal side contains 29 pcs of のアミノ acid, and the C-terminal side contains 8 pcs of のアミノ acid. The 37 のアミノ acid から成るホルモンで and the グルカゴンと are very similar to the したstructure を有する. In the presence of そこで, このOXMがNEP, the ではどのような influence is affected by the けているのかについて, and the LC-MS/MS is used in detail. The original LC-MS/MS was performed in the presence of NEP. In the presence of NEP, the confirmation of the large きく3つのピークが, the detailed analysis of the そのうちの1つをに, and the 3つのピークがConfirm the existence of され, NEP によってグルカゴンは 5つの decomposition products することが明らかになった. OXM もグルカゴンと同様にNEP exists での検question を行うと, 大きなピークが1つのみconfirmed できた. Change the analysis of すると, the molecular weight of が184.12 reduced したペプチドに変change to されたことが明らかとなった. OXMがNEPによってGenerationされるペプチドのstructuralをESTIMATIONすると、OXM（1-37）のC-terminal side の2 つのアミノ acid がした OXM (1-35) が generate されることが ESTIMATE された.そこでOXM（1-35）をSynthesisし、LC-MS/MSでConfirmationすると、でのOXM in the presence of NEP Decomposition products of (1-37) and synthesis of OXM (1-35) are consistent and confirmed. OXMはグルカゴン/GLP-1のdual agonistであるとのreportがあるため、OXM（1-35）のacceptor activityをin In vitro, it has been confirmed that OXM (1-35), OXM (1-37), OXM (1-37) and OXM (1-37) are equivalent to the same のグルカゴン and GLP-1 receptor activity. From now on, in vivo OXM (1-35) has a physiological effect and has a physiological effect.