ヒルシュスプルング病有神経節腸管における神経及び免疫細胞の相互発生制御機構の検証

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1．腸管免疫系、神経系の発生過程における形態学的観察初年度及び次年度で確立した腸管組織透明化による三次元イメージング法、特にパイエル板の透明化ホールマウント検体を用い、ヒルシュスプルング病（H病）モデルマウスにおける腸管神経系及び免疫系の経時的な発生過程の検証を行った。高解像度レーザー顕微鏡を用い、出生7日のコントロールマウスにおけるパイエル板内におけるPSA-NCAM（未熟神経マーカー）陽性の微細な神経線維の観察に成功した。しかしパイエル板内におけるTuj1（成熟神経マーカー）陽性の神経線維の観察が困難であったこと、またH病モデルマウスにおけるパイエル板はコントロールマウスのそれよりも更に小さく、再現性のある神経線維の観察も困難であったことより、パイエル板における神経線維と免疫細胞の発生過程における相互関係を形態学的に観察することは困難であると結論付けた。H病難治性腸炎において、腸管免疫応答の活性化に重要な役割をもつとされるM細胞に着目して上記三次元イメージング解析でコントロールマウスとH病モデルマウスの比較検証を行うことを試みた。出生24日のマウスを使用しGP２（成熟M細胞マーカー）及びSpiBによる免疫染色を施行。切片における評価ではH病モデルマウスのGP2陽性M細胞が少ない傾向であった。しかし三次元イメージングにより濾胞随伴上皮層におけるM細胞の観察を試みるも、コントロールマウス、H病モデルマウスともに極僅かの細胞しか観察されず、また再現性の確立も困難であった。