ヒルシュスプルング病有神経節腸管における神経及び免疫細胞の相互発生制御機構の検証

先天性巨结肠神经节状肠道神经与免疫细胞发育相互调控机制的验证

• 批准号: 20K17593
• 负责人: 武田 昌寛
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K17593/
• 关键词: ヒルシュスプルング病; 発生; 神経; 免疫; M細胞; 組織透明化; 蛍光イメージング技術

1．腸管免疫系、神経系の発生過程における形態学的観察初年度及び次年度で確立した腸管組織透明化による三次元イメージング法、特にパイエル板の透明化ホールマウント検体を用い、ヒルシュスプルング病（H病）モデルマウスにおける腸管神経系及び免疫系の経時的な発生過程の検証を行った。高解像度レーザー顕微鏡を用い、出生7日のコントロールマウスにおけるパイエル板内におけるPSA-NCAM（未熟神経マーカー）陽性の微細な神経線維の観察に成功した。しかしパイエル板内におけるTuj1（成熟神経マーカー）陽性の神経線維の観察が困難であったこと、またH病モデルマウスにおけるパイエル板はコントロールマウスのそれよりも更に小さく、再現性のある神経線維の観察も困難であったことより、パイエル板における神経線維と免疫細胞の発生過程における相互関係を形態学的に観察することは困難であると結論付けた。H病難治性腸炎において、腸管免疫応答の活性化に重要な役割をもつとされるM細胞に着目して上記三次元イメージング解析でコントロールマウスとH病モデルマウスの比較検証を行うことを試みた。出生24日のマウスを使用しGP２（成熟M細胞マーカー）及びSpiBによる免疫染色を施行。切片における評価ではH病モデルマウスのGP2陽性M細胞が少ない傾向であった。しかし三次元イメージングにより濾胞随伴上皮層におけるM細胞の観察を試みるも、コントロールマウス、H病モデルマウスともに極僅かの細胞しか観察されず、また再現性の確立も困難であった。

1. Morphological observation of intestinal immune system and nervous system development in the first and second years to establish a three-dimensional model of intestinal tissue transparency, High-resolution microscopes are used, and the 7-day-old PSA-NCAM (immature neurology) positive micro-neurology observation is successful.しかしパイエル板内におけるTuj1 (Mature Neurology) Positive Neurology Detection Difficulty It is difficult to observe the relationship between the development of the nervous system and the immune cells. H disease refractory enteritis, intestinal immune response activation of the important role of the role of M cells in the study of the three dimensional analysis of the disease On the 24th day of birth, we used GP2 (mature M cells) and SpiB immunostaining. The number of GP2-positive M cells in the tissue was decreased. 3-D filter media associated with M cell detection, H cell detection and reproduction

项目成果

Biopsy diagnosis of Hirschsprung’s Disease using a single excisional biopsy based on the anorectal line.

使用基于肛门直肠线的单次切除活检对先天性巨结肠进行活检诊断。

• DOI: 10.1055/a-2065-9071
• 发表时间: 2023
• 期刊: European Journal of Pediatric Surgery
• 影响因子: 1.8
• 作者: Takeda Masahiro;Ochi Takanori;Koga Hiroyuki;Tsuboi Koichi;Arakawa Atsushi;Lane Geoffrey J;Yamataka Atsuyuki
• 通讯作者: Yamataka Atsuyuki

Anorectal lineを基準とした直腸粘膜生検(単一検体)によるHirschsprung病診断の有用性の検証

基于肛门直肠线的直肠粘膜活检（单个标本）验证先天性巨结肠诊断的有效性

• 发表时间: 2022
• 作者: 目井孝典;大西秀哉;野口 浩司;倉治 竜太郎;佐藤 優;久留 裕;加来 啓三;岡部 安博;中村 雅史;武田昌寛
• 通讯作者: 武田昌寛