革新的技術による微小転移の可視化と転移初期段階の分子機構の解明

利用创新技术实现微转移可视化并阐明转移早期的分子机制

• 批准号: 20K17756
• 负责人: 柴野 智毅
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K17756/
• 关键词: 肺癌; 微小転移; 肺がん; 転移; 微小環境

D-Luciferinを用いた転移モデルA549, H441, H2009, LC-2/ad, H2228をそれぞれマウスの左心室内に移植し転移モデルを作成した。A549およびH441は多臓器への転移を認めたものの、H2009, LC-2/ad, H2228はIVISにて検出可能な転移はみられなかった。後者の細胞を移植したマウスの組織標本を確認すると、ごく少数の細胞により形成された転移巣を僅かに確認することができた。これらが微小転移のモデルになり得ると考えられた。Akalucを用いた微小転移モデルの解析上記実験よりH2009, LC-2/ad, H2228はマウスの左心室に移植することで微小転移を形成することが判明した。しかしながら従来のD-luciferinを用いたモデルではIVISで微小転移を検出することができず、また屠殺後の組織標本でも小さな転移巣を確認することは困難であった。そのため、D-luciferinに代わる新しい人工生物発光システム（AkaBLIS）と組織透明化技術（CUBIC）を用いて微小転移を可視化する実験へと移行した。AkaLuc遺伝子に赤色蛍光タンパク質mCherryもしくはVenusの遺伝子を連結した発現ベクターを肺腺がん細胞H2009に発現させた細胞株を作成し、上記と同様に転移実験を行なった。AkaLucを用いた解析ではIVISにおいてD-Luciferinでは検出できなかった転移巣を特定することに成功した。また経時的には移植後3週目までは発光が次第に消退していくが、3週目以降は発光部位が局在化し、一定の期間定常化した後、徐々に発光が強くなる傾向がみられた。これはがんの転移形成の初期段階の経過を見ているものと考えられた。

D-Luciferin was implanted into the left ventricle of the heart using the D-Luciferin receptor A549, H441, H2009, LC-2/ad, H2228. A549 H441 A few cells were transplanted and identified. This is a very small change. Akaluc is used in the analysis of small shifts in H2009, LC-2/ad, H2228. D-Lucifer is the only one who can be identified. AkaBLIS and CUBIC are new technologies for the visualization of micro-shifts. AkaLuc gene is red light, mCherry gene is red light. AkaLuc uses the D-Luciferin to resolve problems. After 3 weeks of transplantation, the light emission decreased gradually, and the light emission decreased gradually after 3 weeks. The initial stage of the formation of the reverse phase is seen in the middle of the test.