Roles of efferocytosis in intracranial aneurysm rupture

胞吞作用在颅内动脉瘤破裂中的作用

• 批准号: 20K17933
• 负责人: 宮本 健志
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K17933/
• 关键词: 脳動脈瘤; エフェロサイトーシス; アポトーシス

令和4年度は令和3年度に引き続いて動物や試薬、器具等の購入、データの整理、新規実験計画の修正、実行を行った。これまでに遺伝子操作によるエフェロサイトーシス不全を起こしたマウス(ノックアウトマウス)では有意に脳動脈瘤破裂が増加することを明らかにした。ノックアウトマウスと野生型のマウスの血圧を比較したところ、2 群間でDOCA誘発性高血圧に有意差はなかった。血圧に関係なく、遺伝子的差異が脳動脈瘤破裂を増加させたと考えられた。エフェロサイトーシス不全は脳動脈瘤破裂を増加させることが示せた。ヒトおよび動物で脳動脈瘤におけるエフェロサイトーシスを同定し、背景にある分子機構を解明する予定である。ヒト脳動脈瘤血管壁を用いて、免疫組織化学染色や免疫蛍光染色を行った。過去の文献を参考にして、アポトーシスを証明する方法としてCleaved Caspase 3、TUNEL染色を行いながら、抗体や染色条件の変更など、至適条件を検討中である。また、脳動脈瘤動物モデルでノックアウトマウスと野生型のマウスにおいて、脳動脈瘤破裂に至る分子機構を明らかにするため、RT-PCRを行った。脳血管壁において炎症関連分子を比較したところ、ノックアウトマウスでは炎症関連分子が上昇している傾向にあった。他の関連分子やタンパク質、血漿中の関連分子についても解析を続ける予定である。実験計画にある他の遺伝子改変マウスを使った実験や阻害抗体を用いた実験についてはマウスが入手困難であった。代替実験について検討中である。

2022年，在2021年，我们购买了动物，试剂，设备等，有组织的数据，修订并实施了新的实验计划。已经发现，患有基因工程性麻醉衰竭（基因敲除小鼠）的小鼠中脑动脉瘤破裂显着增加。比较了敲除和野生型小鼠之间的血压，并且两组之间由DOCA诱导的高血压没有显着差异。人们认为，无论血压如何，遗传差异会增加脑动脉瘤破裂。可以证明，蠕虫细胞增多症的衰竭会增加脑动脉瘤破裂。在人类和动物中将鉴定出脑动脉瘤中的白细胞增多症，并阐明了潜在的分子机制。使用人脑动脉瘤的血管壁进行免疫组织化学和免疫荧光染色。使用过去的文献，我们目前正在考虑最佳条件，例如改变抗体和染色条件，同时进行切割的caspase 3和Tunel染色作为证明凋亡的方法。此外，还进行了RT-PCR来阐明敲除小鼠的脑动脉瘤破裂的分子机制，而野生型小鼠在脑动脉瘤的动物模型中进行了野生型小鼠。当比较脑血管壁中与炎症相关的分子时，在敲除小鼠中有升高炎症相关的分子的趋势。我们计划继续分析血浆中其他相关分子，蛋白质和相关分子。在实验设计中，使用其他遗传改性小鼠的实验很难获得小鼠，并使用抑制性抗体进行了实验。正在考虑一个替代实验。