Rspo2を用いた新たな骨再生治療

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前年度まで行った、Vitroでの骨形成能に関する実験の定量化を行った。網羅的な発現遺伝子の解析では、Rspo2を投与することで、血管新生に関する遺伝子の発現上昇を認めた。大腿骨偽関節モデルラットに自己組織化ペプチドを移植し、骨形成能を評価した。本研究では、自己組織化ペプチド内にrhRspo2とrhBMP2を適量含有させて移植し4週と8週後における骨再生能を評価した。BMP2投与でも骨形成は旺盛であったが、Rspo2を投与することで、より骨形成が促された。再生能は、新生骨をμCTで継時的に画像評価し、骨梁構造について評価を行っている。骨再生機序を川本法で作製した凍結切片やパラフィン切片を用い、HE染色、Villanueva Goldner stain染色、免疫組織化学染色でCollagen Type Iたんぱく質の量を評価し、Rspo2を投与することで、骨成熟に関する因子の増加を認めた。また骨折部組織を回収して、定量的RT-PCRを行い骨分化関連遺伝子や血管新生関連遺伝子(VEGF, VEGFR-2, Angiopoietinなど）の発現を定量評価したが、BMP2単独に比べて、Rspo2を投与することで、血管新生が移植後初期から促されていた。さらに、これらの実験方法や血液検査で周囲組織の炎症や腫瘍発生などの副作用も評価したが、明らかな副作用と思われる高度な周囲組織の炎症や腫瘍形成は認めなかった。