Rspo2の神経筋接合部形成に対する役割の解明

阐明 Rspo2 在神经肌肉接头形成中的作用

• 批准号: 25893092
• 负责人: 中島 宏彰
• 金额: $ 1.75万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-08-30 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-25893092/
• 关键词: 神経筋接合部; 脊髄運動神経; Wnt

神経筋接合部は、agrin及びWnt ligandによりアセチルコリンレセプターが筋表面で凝集する事で形成される。Agrinは運動神経端末から放出されるが、普遍的に発現するWnt ligandがどのように神経筋接合部の空間的位置づけを行っているかは不明であった。今回我々は、分泌蛋白であるR-spondin2 (Rspo2)が運動神経端末から分泌され、Wntシグナルを調節する事で、神経筋接合部の形成に大きく関わる事を同定した。まず、6週齢のC57BL6 / Jマウスの脊髄運動神経細胞(SMN)をレーザーマイクロダイセクションを用いて摘出し、遺伝子発現を分析したところ、 Rspo2が特異的にSMNに発現していた。in situハイブリダイゼーションによってRspo2の発現を確認すると、Rspo2はSMNに特異的に発現していた。次にRspo2欠損マウスを解析すると、マウスは呼吸困難のため出産直後に死亡した。Rspo2欠損マウスでSMNsの数をカウントすると、コントロールと変わらなかったが、運動神経枝である横隔神経枝の長さ及び分岐数を増加させていた。更にRspo2 -/-マウスでNMJの形成を分析すると、E14.5での野生型マウスにおけるスレッド状のエンドプレートとは対称的に、 Rspo2 欠損マウスの終板は、中央が透明で紡錘状を呈していた。Rspo2 -/-のNMJの超微細構造を電子顕微鏡を用いて観察するとactive zoneの減少を認め、活動電位にも異常を認めたためNMJ機能不全が示唆された。HEK293細胞におけるJNK-ATF-2ルシフェラーゼ（ATF2 -luc）レポーターを使用して、MuSKの活性化に対するRspo2の効果を評価しすると、Rspo2はagrinの80％ 活性化し、MuSKのリン酸化を増強した。MyotubeにおけるAChRのクラスタリングでも同様の結果が得られた。

The joint of the tendon is formed by aggregation on the surface of the tendon, agrin and Wnt ligand The position of the space of the muscle joint is unknown. Now, R-spondin 2 (Rspo 2) is involved in the regulation of the secretion of motor neurons and the formation of neuromuscular junctions. C57BL6/J cells were isolated from the spinal cord motor neurons (SMN) at 6 weeks of age and were analyzed for gene expression and Rspo 2-specific SMN expression. The occurrence of Rspo 2 in situ is confirmed, and the occurrence of Rspo 2 in SMN is confirmed. Rspo 2 is short of analysis, it is difficult to produce The number of SMNs in the Rspo 2 deficit increased, and the number of transverse branches increased. In addition, the formation of NMJ in Rspo 2-/-was analyzed. The wild-type NMJ in E14.5 was characterized by an endplate and a transparent spindle in the center of Rspo 2-/-. The ultra-fine structure of Rspo 2-/-NMJ can be detected by electron microscope, and the reduction of active zone can be detected by electron microscope. HEK 293 cells were used to evaluate the effects of JNK-ATF-2 activation on Rspo 2, and MuSK activation was enhanced. Myotube's AChR's search results are similar.

项目成果

R-spondin2 is crucial for neuromuscular junction formation

R-spondin2 对于神经肌肉接头的形成至关重要

• 发表时间: 2013
• 作者: Wang C;Yatsuya H;Tamakoshi K;Uemura M;Li Y;Wada K;Yamashita K;Kawaguchi L;Toyoshima H;Aoyama A;Hiroaki Nakashima
• 通讯作者: Hiroaki Nakashima