アデノ随伴ウイルス-CRISPR/Cas9を用いた卵巣癌の新規遺伝子治療戦略

利用腺相关病毒-CRISPR/Cas9治疗卵巢癌的新基因治疗策略

• 批准号: 20K18171
• 负责人: 八幡 環
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Wakayama Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K18171/
• 关键词: AAV-CRISPR/Cas9 system; 卵巣癌; PD-L1; アデノ随伴ウイルスベクター; IDO

本研究ではAAV-CRISPR/Cas9 systemを用いて、卵巣癌に発現するPD-L1遺伝子を欠損させることで、新規遺伝子免疫療法の有用性を実証することを目的としている。2020年度は、in vivoで卵巣癌のPD-L1を直接欠損させるPD-L1遺伝子を欠損させるAAV-CRISPR/Cas9 system (AAV-down-Pdl1およびAAV-up粒子 (以下、PD-L1-AAV粒子))を作製した。in vitro実験において、Control-AAV粒子と比較して、PD-L1-AAV粒子をtransduceした細胞株において、PD-L1発現が低下していることを確認した。2021年度および2022年度では、iv vivo実験を実施し、ID8をC57BL/6 mice(WT)に腹腔内投与した卵巣がん腹膜播種モデルにおいて、PD-L1-AAV粒子を腹腔内投与した群では、生存率、および播種重量において、Control-AAV粒子を投与した群と比較し、有意に生存率が延長し、腫瘍重量が減量した。さらにPD-L1-AAV粒子投与群では、Control-AAV粒子投与群と比べ、腫瘍内のCD4陽性T細胞、CD8陽性T細胞は有意に増加し、FOXP3陽性Treg細胞は有意に減少することを確認した。さらにPD-L1-AAV粒子における、正常臓器への有害事象は認めなかった。これら結果から、PD-L1-AAV粒子を用いた治療は卵巣癌の新規免疫遺伝子治療の基盤となり得る可能性が示唆され、論文投稿予定である。

The purpose of this study is to demonstrate the usefulness of new gene immunotherapy in the development of AAV-CRISPR/Cas9 system and PD-L1 gene deficiency in ovarian cancer. In 2020, the AAV-CRISPR/Cas9 system (AAV-down-PDl1 and AAV-up particles (hereinafter PD-L1-AAV particles)) will be implemented in vivo for direct PD-L1-deficiency in ovarian cancer. In vitro detection, Control-AAV particle comparison, PD-L1-AAV particle transduction, PD-L1 expression reduction In 2021 and 2022, iv vivo administration was carried out, ID8 C57BL/6 rice (WT) was intraperitoneally administered with intraperitoneal seeding, PD-L1-AAV particles were intraperitoneally administered with population, survival rate, seeding weight, Control-AAV particles were administered with population, intentional survival rate was prolonged, tumor weight was reduced. We confirmed that PD-L1-AAV particle population, Control-AAV particle population, CD4-positive T cells and CD8-positive T cells in tumors increased intentionally, and FOXP3-positive Treg cells decreased intentionally. PD-L1-AAV particles, normal organs and harmful events are recognized. The results show that PD-L1-AAV particles can be used in the treatment of ovarian cancer.

项目成果

Adeno associated virus-CRISPR/Cas9-mediated ovarian cancer treatment targeting PD-L1 gene in vivo

腺相关病毒-CRISPR/Cas9介导的体内靶向PD-L1基因的卵巢癌治疗

• 发表时间: 2022
• 作者: Yahata T;Iwahashi N;Ino K
• 通讯作者: Ino K

アデノ随伴ウイルス-CRISPR/Cas9を用いた卵巣癌のPD-L1遺伝子を標的とした新規遺伝子治療戦略

利用腺相关病毒-CRISPR/Cas9针对卵巢癌PD-L1基因的新型基因治疗策略

• 发表时间: 2021
• 作者: Taguchi A;Nagasaka K;Plessy C;Nakamura H;Kawata Y;Kato S;Hashimoto K;Nagamatsu T;Oda K;Kukimoto I;Kawana K;Carninci P;Osuga Y;Fujii T.;八幡 環
• 通讯作者: 八幡 環