プロゲステロン受容体シグナルによる妊娠維持及び破綻による早産誘導の分子機構

孕激素受体信号维持妊娠及分解诱导早产的分子机制

基本信息

批准号：
20K18204
负责人：
杉田洋佑
金额：
$ 1.58万
依托单位：
Nippon Medical School
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

子宮頸部におけるプロゲステロン(P4)シグナルによる妊娠維持のメカニズム解明のため、臨床背景の異なる症例の子宮頸部線維芽細胞培養系(UCFs)を樹立し、P4応答を比較した。妊娠中期に異常な熟化をきたす難治性頸管無力症患者に対して経腹的子宮頸管縫縮術を実施し妊娠維持した症例を頸管完全熟化症例(n=3)として、正常に妊娠維持した子宮頸管未熟化のコントロール(n=3)として帝王切開時に子宮頸部組織を採取した。培養細胞へのP4添加による遺伝子発現の変化をRNAsequenceで解析したところ、未熟化例で認めるP4応答が頸管無力症症例で減弱していることを確認した。さらにその原因としてP4受容体(PR)の発現をリアルタイムPCR、ウエスタンブロット(WB)、細胞免疫染色で解析したところ、頸管熟化症例ではPRが顕著に減少していた。一方でRNA-sequenceによる網羅的な解析において子宮頸管未熟化例に共通して認めるP4応答遺伝子は少数に限られ、P4の直接的な作用は限定的であることが示唆された。さらに頸管熟化のメカニズムを検討するためマウス早産モデルとして妊娠15日目マウスにP4受容体拮抗薬を投与し12時間後に子宮頸部を摘出し解析した。P4消退により誘導されるサイトカインをPCRアレイで解析し、複数のサイトカイン、ケモカインを抽出した。さらにFACSにより子宮頸部における細胞分画を抽出しそれぞれ遺伝子発現を検索することで、特定の細胞におけるCCL11の発現増加と好酸球誘導がP4消退による頸管熟化過程において誘導されていることを明らかにした。さらにマウス子宮頸部を用いたsinglecell RNA sequenceによりCCL11と直接的に頸管熟化へ関与することが知られているプロテアーゼやプロスタグランジンなどとの関連を解析している。

为了阐明子宫颈中孕激素（P4）信号维持妊娠的机制，在建立了不同临床背景的情况下，比较了P4反应。在怀孕中期患有异常成熟的顽固性宫颈无症患者进行了腹部腹颈缝线和维持妊娠的情况，在该情况下，对宫颈成熟进行了完全成熟的宫颈成熟（N = 3），并在Cesearean As Contrication（N = 3）中进行了宫颈组织，以进行3米= 3次。当使用rNasequences分析由P4添加到培养细胞中引起的基因表达的变化时，证实在未成熟病例中观察到的P4反应在宫颈insthenia病例中减弱。此外，原因是使用实时PCR，Western印迹（WB）和细胞免疫染色的P4受体（PR）表达分析，并且在宫颈成熟的情况下，PR显着降低。另一方面，使用RNA序列的全面分析表明，未成熟宫颈病例中常见的P4反应基因仅限于少量，这表明P4的直接作用受到限制。此外，为了研究宫颈成熟的机制，作为小鼠过早出生的模型，在怀孕的第15天对小鼠进行了P4受体拮抗剂，并切除了子宫颈并在12小时后分析。通过PCR阵列分析了通过P4缩回诱导的细胞因子，并提取了多种细胞因子和趋化因子。此外，通过使用FACS提取子宫颈中的细胞级分并寻找基因表达，可以发现在P4回归引起的宫颈成熟过程中，诱导了CCL11和特定细胞中嗜酸性细胞诱导的表达增加。此外，我们分析了CCL11与蛋白酶与前列腺素之间的关系，这些关系通过使用小鼠宫颈腔的单核RNA序列直接参与了宫颈成熟。