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角膜実質創傷治癒での細胞外基質蛋白質ルミカンの機能解析に基づいた新規治療戦略

基于细胞外基质蛋白 lumican 在角膜基质伤口愈合中的功能分析的新治疗策略

基本信息

批准号：
20K18390
负责人：
鈴木映美
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Wakayama Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

角膜全層切開モデルにおいて創作成5日後と10日後で創間距離を測定した。創は間質の最深部で測定した。創作成5日後のノックアウトマウス角膜では有意に創間距離が長かった。10 日目では創間距離に有意差は無かったが、創傷に形成された肉芽組織は、野生型マウスと比較してノックアウトマウスの方が大きいように見えた。これにより、ルミカンノックアウトマウスにおいて創傷治癒が遅延することを確認した。また、免疫組織学的検討により、ノックアウトマウス角膜では筋線維芽細胞の発現が抑制されていることがわかった。フィブロネクチンの発現については差がなかった。角膜より得たｍRNAよりリアルタイムRT-PCRを施行したところ、αSMAの発現がノックアウトマウスにおいて低下していた。これらの結果をもとに、ルミカンは筋線維芽細胞の発現と関係して創傷治癒遅延に関わっていることを想定した。その機序解明を目的として、in vitroでの研究を行った。マウスの眼球を培養して得た眼線維芽細胞についてreal time RT-PCRを行った。外因性TGFβ1への曝露により野生型マウスの培養線維芽細胞ではαSMAおよびコラーゲン 1a1の mRNA 発現がアップレギュレートされたが、ルミカンの損失によってそれらが打ち消された。また、蛍光免疫染色を行ったところ、Ｓｍａｄ染色で野生型マウスとノックアウトマウスで染色差を認めた。これにより、ルミカンのシグナル伝達はＳｍａｄ経路と関係していることが考えられた。

The distance between the incisions was measured 5 days after the incision. The deepest part of the interstitial tissue was measured. After 5 days of creation, the distance between the cornea and the intended wound is very long. 10 days ago, the distance between wounds was intentionally different, and the granulation tissue was formed. The wound healing process was delayed. Immunohistologic examination of the cornea showed that the development of vascular cells in the cornea was inhibited. The appearance of the film is not easy. The mRNA expression of αSMA was detected by RT-PCR. The result of this study is that the relationship between the development of vascular cells and wound healing is determined. The purpose of the study is to understand the mechanism and conduct research in vitro. Real time RT-PCR was performed on cultured eyeball cells. Exogenous TGF-β1 gene exposure in wild-type cells in cultured cells, αSMA gene expression and mRNA expression of TGF-β 1 gene expression in cultured cells were reduced. The wild type was identified by light immunostaining and Smad staining The relationship between the two sides of the strait is not only a matter of time, but also a matter of time.