Development of treatment for aspiration pneumonia using exosomes secreted by stem cells

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加齢とともに肺炎による死亡率は増加し，諸家の報告により異なるが，高齢者の肺炎の70%以上が誤嚥性肺炎であるといわれている．誤嚥性肺炎に対し口腔ケア，嚥下訓練による予防が行われているが，根本的な治療法はなく，新しい治療法の開発が求められている．前年度までは，In vitroの実験を中心に進めエクソソームには抗炎症効果，末梢神経再生効果を有することがわかった．今年度は，In vivoの実験を中心に進めた．エクソソームは，歯髄幹細胞培養上清より超遠心法のペレットダウン法を用いて分離した．分離した試料がエクソソームであることを確認するために動的光散乱法，電子顕微鏡，ウェスタンブロット法をした．本研究では，ラットの上喉頭神経を圧挫した嚥下障害モデルを用いて，エクソソームによる治療効果の可能性を検討した．まずは，嚥下障害モデルラットに対するエクソソームの投与方法について検討し，今回は尾静脈より単回投与することを選択した．実験群は．偽手術群，損傷群，エクソソーム投与の3群を設定した．それぞれの群のラットの体重の変化，嚥下回数，摂水量を測定し比較した．損傷した上喉頭神経の電気生理学的評価や遺伝子学的変化をリアルタイムPCR法にて定量化した．また，トルイジンブルー染色や透過型顕微鏡を用いて神経軸索を形態学的に評価した．肺の炎症変化は，H-E染色，リアルタイムPCR法にて評価した．末梢血を採取し，白血球数やC反応性タンパク（CRP）にて炎症の程度を評価，サブスタンスPにて嚥下障害の程度を評価した．これらの結果をまとめ，今後は治療効果のメカニズムについて検討していく予定である．