野生型マウス顎下腺上皮細胞株を用いた唾液腺組織再構成と分泌機能評価システムの構築

野生型小鼠颌下腺上皮细胞系唾液腺组织重建及分泌功能评价系统

• 批准号: 20K18569
• 负责人: 池浦 一裕
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Hospital Organization Tokyo Metropolitan Komagome Hospital
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K18569/
• 关键词: 唾液腺再生; 口腔乾燥; 細胞株; 分化誘導能; 筋上皮細胞; 腺房細胞; 導管上皮基底細胞; 唾液

加齢や放射線治療による唾液腺機能低下に伴う口腔乾燥症は患者の生活の質を著しく低下させる。そのため失われた唾液腺組織再生を試みる研究は多数報告されており、これらの研究ではヒト・ラットなどから樹立した唾液腺細胞株を用いているが、それらは腫瘍細胞由来・遺伝子改変動物由来であり、マウスにおける自然発生的な細胞株の報告はない。また唾液腺細胞を初代培養の表現型を保ちながら長期間培養することは困難とされ、現在までごく短期間の培養報告があるのみである。そこで本研究では唾液腺組織再生に有用な細胞源の確保と特性解析、さらに腺組織分泌機能評価が可能なシステム構築を行うことを目的とする。接着培養系では導管上皮基底細胞と同様の表現型を呈する細胞が得られたが、これらは低カルシウム、無血清、コレラトキシン、0.1%ゼラチンコートを用いた培養を行い分化を抑制した結果得られた細胞群である。そのためカルシウムや血清を用いた刺激を加えることで分化型細胞の特性を知ることが可能であると予想された。また三次元培養法を用いることで腺組織の再構築が可能ではないかと考えられた。そこで以下の2項目の検討を行った。（1）血清、カルシウム濃度勾配による刺激を加えることで筋上皮細胞誘導の可能性を検討した。その結果、1mMカルシウムおよび5%血清、さらに5ng/mlのTGF-β1添加による刺激を加えることで筋上皮細胞マーカーであるα-SMA陽性細胞が得られることが確認できたが、安定供給が可能な培地の検討が引き続きの検証課題である。（2）コラーゲンゲルを用いた三次元培養法により腺房構造の誘導を検討した。その結果、三次元培養を用いた細胞塊（Salivary Sphere）および管腔構造細胞塊（Cyst）の作製に成功した。腺組織分泌機能評価のアッセイ系確立に向けた細胞塊の作成と評価方法の検証が引き続きの課題である。

与放射疗法引起的与衰老和衰老和低染色腺功能相关的Xinintosis可显着降低患者的生活质量。因此，据报道，许多研究试图再生唾液腺组织丧失，尽管这些研究使用了从人，大鼠等建立的唾液腺细胞系。它们是从肿瘤细胞或遗传修饰的物质中得出的，并且在小鼠中没有自然存在的细胞线。此外，认为很难长期培养唾液腺细胞，同时保持原代培养物的表型，而到目前为止，只有简短的培养报告已被报道。因此，本研究旨在确保和表征可用于唾液腺组织再生的细胞源，并构建可以评估腺体组织分泌功能的系统。在粘附的培养系统中，获得了与导管上皮基底细胞相同的表型的细胞，但是这些细胞是通过使用低钙，无血清，无血清，胆碱毒素和0.1％明胶涂层培养来抑制分化而获得的细胞基团。因此，可以预测，可以通过使用钙或血清施加刺激来学习分化细胞的特征。还认为，使用三维培养方法将允许重建腺组织。因此，我们讨论了以下两个点：（1）通过用血清和钙浓度梯度施加刺激来研究肌上皮细胞诱导的可能性。结果，可以通过添加1 mM钙和5％的血清以及5 ng/ml的TGF-β1来获得α-SMA阳性细胞，即肌上皮细胞标记物，但是对稳定供应能力的培养基的研究是对验证的持续挑战。 （2）使用胶原蛋白凝胶通过三维培养方法研究腺泡结构的诱导。结果，我们使用三维培养物成功地生产了细胞质量（唾液球）和腔结构细胞质量（囊肿）。持续的挑战是创建细胞肿块并验证用于建立评估腺组织分泌功能的测定系统的评估方法。