矯正歯科治療中の歯周炎に対するラクトフェリン研究に基づく新規ペプチド創薬の開発

基于乳铁蛋白研究的正畸治疗期间牙周炎的新肽药物开发

• 批准号: 20K18758
• 负责人: 山田 桜
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K18758/
• 关键词: ラクトフェリン; 矯正歯科; ペプチド医薬; 骨破壊性病変

実験1 マクロファージおよび骨芽細胞における新規ペプチドの生理作用:LPSは、炎症性サイトカインの発現を増加させ、そこからパラクライン オートクラインによって破骨細胞分化因子の発現を増加させ、破骨細胞分化を誘導する。1)サイトカイン発現に及ぼす影響：まず、炎症性サイ トカインおよび破骨細胞分化因子に及ぼすbLFペプチドの効果を検証するために、ヒトマクロファージ細胞THP-1およびマウス骨芽細胞様細胞ST -2を用い、ペプチドを前投与した後、LPSを投与し、細胞および上清の回収を行う。上清のELISA解析および細胞のRNA抽出を行い、TNFαやIL-1 βなどの炎症性サイトカインおよびRANKLやOPGなどの破骨細胞分化因子のタンパク質発現やmRNA発現についてすでに明らかとなっているbLFの 抑制効果と比較する。　2)破骨細胞分化に及ぼす影響：新規bLFペプチドが破骨細胞形成に及ぼす影響を評価する。実験系にはbLFの影響を検討したST-2細胞およびマウス骨髄由来マクロファ ージ細胞（BMDM）の共培養を用いる. 実験2 ラット歯周炎モデルにおけるペプチドの影響 :実験には、我々が既に確立しているラット歯周炎モデルを作製し、破骨細胞の出現が確認 されている3時間、3日後の歯周組織を回収する。ラットにはあらかじめbLFペプチドを投与した後、LPSを投与するペプチド群とLPSのみ投与す るLPS群を作製し、免疫組織化学染色を行い、歯根膜におけるRANKL、OPG、および炎症性サイトカインの発現を検討する。さらに、歯根膜歯槽 骨面に誘導される破骨細胞の出現に与える影響を評価し、比較・検証する。実験１２でpeptideはLFと同様の効果を有していた。

Physiological effects of LPS on osteoclast differentiation:LPS increases the production of inflammatory cytokines, increases the production of osteoclast differentiation factors, and induces osteoclast differentiation. 1) Expression and effects of inflammatory cytokines and osteoclast differentiation factors on T-2 cells, T-1 cells and T-2 cells. ELISA analysis of supernatant and RNA extraction from cells, TNFα, IL-1 β and RANKL, OPG and osteoclast differentiation factors in the production of osteoclast protein and mRNA expression, and their inhibitory effects. 2)Osteoclast differentiation and its effects: evaluation of the effects of the new rules on osteoclast formation and differentiation To investigate the effects of BLF on ST-2 cells and BMDM co-culture. 2. Periodontitis was observed and the effect of osteoclast on periodontitis was observed: 3 days after the onset of periodontitis, osteoclast was observed and the periodontal tissue recovered. After injection of LPS, preparation of LPS group, immunohistochemical staining, and identification of RANKL, OPG, and inflammatory cells in the dental root membrane. To evaluate the effect of osteoclast induction on dental root canal bone surface 12. Peptide is the same as LF.