一回感染性ウイルス様粒子を用いたフラビウイルス脳炎における診断法の確立と実用化

单一感染性病毒样颗粒黄病毒脑炎诊断方法的建立及实际应用

• 批准号: 20K18917
• 负责人: 山口 宏樹
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Hokkaido Institute of Public Health
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K18917/
• 关键词: ダニ媒介脳炎; ダニ媒介性脳炎; 一回感染性ウイルス様粒子; SRIPs; ウイルス様粒子; フラビウイルス; エゾウイルス; ダニ媒介脳炎ウイルス; 診断

当所では、「Strep-tagを付加した北海道由来のダニ媒介脳炎ウイルスのウイルス様粒子」を抗原とするIgG-ELISA及びIgM捕捉ELISAを用いたスクリーニング検査を地方自治体で唯一実施し、患者の早期発見に貢献してきた。しかし、フラビウイルスの交差性の問題により、ELISAにおいて偽陽性が発生することは避けられず、確認検査として生ウイルスを用いたBSL-3施設における中和試験の実施が必要不可欠であった。そこで、本研究では、BSL-2施設で実施可能な「一回感染性ダニ媒介脳炎ウイルス様粒子」を用いた中和試験の開発を目的とした。2023年度は、①ウイルス様粒子を作製する工程の改良、②ウイルス様粒子と実際のヒト患者血清を用いた中和試験を実施した。①では、プラスミドのトランスフォーム工程において改良を必要とする部分が確認されたため、継続して実施している。具体的には、用いるコンピテントセル種の選定や、コロニーの選択方法を再検討中である。②では、ダニ媒介脳炎患者血清や、ダニ媒介脳炎を疑われたが検査によって否定された臨床検体などを用いて実施した。その結果、前者血清は一回感染性ダニ媒介脳炎ウイルス様粒子に中和抗体能を有し、後者血清は有さなかった。また、ELISAにおいて陽性・中和試験において陰性、となった検体では中和抗体能を有さなかった。これらは生ウイルスを用いた中和試験と同等の結果であり、一回感染性ダニ媒介脳炎ウイルス様粒子を用いた中和試験は、生ウイルスを用いた中和試験と同等の特異性を有することが示された。2024年度は、一回感染性ダニ媒介脳炎ウイルス様粒子を安定して作製させ、臨床検体を用いた検査数の増加を目指す。なお、本研究におけるヒト臨床検体の使用は、北海道立衛生研究所倫理審査委員会の承認を得て実施した。

When Strep-tag is added to Hokkaido origin virus vector, IgG-ELISA and IgM capture ELISA are used to detect the virus, local governments are the only ones to implement this and contribute to early detection of patients. The test is necessary for the detection of BSL-3 in the presence of false positives in ELISA. In this study, BSL-2 was designed to achieve the goal of "primary infectious vector" neutralization and development. In 2023, the project for the production of small particles and the application of small particles and small serum samples were carried out. (1) To confirm the necessary improvement of the project, the project shall be carried out in accordance with the requirements of the State Council. The specific method of selecting and using the information is discussed again. 2. The serum of patients with viral hepatitis was examined and the clinical symptoms were detected. As a result, the former serum has the ability to neutralize antibodies against infectious agents, while the latter serum has the ability to neutralize antibodies. ELISA is positive, neutralization test is negative, and neutralization antibody is active. The results of this study are as follows: In 2024, there was an increase in the number of infectious agents detected in the study and the number of control measures. The use of clinical samples in this study was recognized by the Ethics Review Committee of Hokkaido Institute of Health.

项目成果

エゾウイルス感染症の診断法開発と疫学調査

埃佐病毒感染诊断方法开发及流行病学调查

• 发表时间: 2021
• 作者: 松野啓太;児玉文宏;山口宏樹;Eunsil Park;立本完吾;前田健;西條政幸
• 通讯作者: 西條政幸

A novel nairovirus associated with acute febrile illness in Hokkaido, Japan.

• DOI: 10.1038/s41467-021-25857-0
• 发表时间: 2021-09-20
• 期刊: Nature communications
• 影响因子: 16.6
• 作者: Kodama F;Yamaguchi H;Park E;Tatemoto K;Sashika M;Nakao R;Terauchi Y;Mizuma K;Orba Y;Kariwa H;Hagiwara K;Okazaki K;Goto A;Komagome R;Miyoshi M;Ito T;Yamano K;Yoshii K;Funaki C;Ishizuka M;Shigeno A;Itakura Y;Bell-Sakyi L;Edagawa S;Nagasaka A;Sakoda Y;Sawa H;Maeda K;Saijo M;Matsuno K
• 通讯作者: Matsuno K

北海道におけるエゾウイルス熱を発見 ～マダニが媒介する新たなウイルス感染症～

北海道发现埃佐病毒热症～通过蜱传播的新病毒感染～

北海道における新規オルソナイロウイルスによる急性発熱性疾患

北海道由新型正呼吸道病毒引起的急性发热性疾病

• 发表时间: 2021
• 作者: 松野啓太;児玉文宏;山口宏樹;Eunsil Park;立本完吾;前田健;西條政幸
• 通讯作者: 西條政幸