共生微生物を利用した生物農薬の機能強化技術

今年度も引き続き天敵ミヤコカブリダニの共生微生物叢を解析した。まず、虫体の部位ごとに細菌叢に違いがあるかどうかを調べることを試みた。人為共生化させるベクターの選択にこの情報は有用である。カブリダニは微小なため、解剖死して部位ごとにサンプルを分けるのが難しい。そこでカブリダニ体表洗浄処理の有無、飢餓処理の有無での細菌叢の違いや糞に見られる細菌叢を比較解析した。その結果、上記処理による細菌叢のOTU数（40から60）や分類群構成割合に大きな違いはなかった。すなわち部位ごとに細菌叢に大きな違いはないと考えられた。次に、抗生物質処理を施したカブリダニの細菌叢を解析した。抗生物質処理すると、検出されるOTU数は減少し、その細菌叢の多様度も低下した。今回は抗生物質処理時間を24時間としたが、処理時間を増加した場合に細菌叢がどのように変化するか、またホストであるカブリダニにどのような変化が起こるかを調べて、細菌叢の機能も調べる必要がある。最後に、カブリダニの微生物叢から培養可能な微生物を分離することを試みた。上記のように体表洗浄処理、飢餓処理を施した雌成虫を破砕して細菌用の寒天培地に塗りつけ、培養後に出現したコロニーを回収して16S rRNAアンプリコン解析に供した。他にカブリダニを歩かせた寒天培地上に出現したコロニーやカブリダニの糞自体からもDNAを抽出して解析した。その結果、検出されたOTU数は10から15程度で多様度も小さかった。具体的にはSerratia属、Staphylococcus属などが検出された。これらは処理間、糞内の構成ともよく似ていた。

今年度も引き続き天敵ミヤコカブリダニの共生微生物叢を解析した。まず、虫体の部位ごとに細菌叢に違いがあるかどうかを調べることを試みた。人為共生化させるベクターの選択にこの情報は有用である。カブリダニは微小なため、解剖死して部位ごとにサンプルを分けるのが難しい。そこでカブリダニ体表洗浄処理の有無、飢餓処理の有無での細菌叢の違いや糞に見られる細菌叢を比較解析した。その結果、上記処理による細菌叢のOTU数（40から60）や分類群構成割合に大きな違いはなかった。すなわち部位ごとに細菌叢に大きな違いはないと考えられた。次に、抗生物質処理を施したカブリダニの細菌叢を解析した。抗生物質処理すると、検出されるOTU数は減少し、その細菌叢の多様度も低下した。今回は抗生物質処理時間を24時間としたが、処理時間を増加した場合に細菌叢がどのように変化するか、またホストであるカブリダニにどのような変化が起こるかを調べて、細菌叢の機能も調べる必要がある。最後に、カブリダニの微生物叢から培養可能な微生物を分離することを試みた。上記のように体表洗浄処理、飢餓処理を施した雌成虫を破砕して細菌用の寒天培地に塗りつけ、培養後に出現したコロニーを回収して16S rRNAアンプリコン解析に供した。他にカブリダニを歩かせた寒天培地上に出現したコロニーやカブリダニの糞自体からもDNAを抽出して解析した。その結果、検出されたOTU数は10から15程度で多様度も小さかった。具体的にはSerratia属、Staphylococcus属などが検出された。これらは処理間、糞内の構成ともよく似ていた。