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マグロの雌雄を決定する遺伝子およびその作用機序の解明

阐明决定金枪鱼性别的基因及其作用机制

基本信息

批准号：
21H02275
负责人：
中村洋路
金额：
$ 10.9万
依托单位：
Fisheries Research and Education Agency
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H02275/
关键词：
マグロ性決定ステロイド代謝遺伝子重複転写制御

项目摘要

クロマグロの性決定遺伝子候補であるsult1st6yについて、そのリコンビナントタンパク質を作製するためにHisタグ付加発現ベクターを構築した。これを用いて大腸菌による発現誘導を試みたところ目的タンパク質が得られなかったため、GSTタグを用いた発現系について条件検討を行った。これらと並行してクロマグロ受精卵を用いたsult1st6yのノックアウト実験系を立ち上げた。具体的には、sult1st6yを特異的に切断するsingle-guide RNA (sgRNA)を設計するとともに、受精卵へのマイクロインジェクションによりsgRNA及びCas9タンパク質について処理条件を至適化した。また、クロマグロの生殖腺細胞を用いてシングルセルRNA-seqを実施するとともに、Assay for Transposase-Accessible Chromatin sequencing (ATAC-seq)によるオープンクロマチン領域の配列情報の収集を開始した。前年度に引き続いて、クロマグロ近縁魚種のsult1st6yおよびそのパラログであるsult1st6aの各エクソンを増幅するPCRプライマーを用いて、コシナガとビンナガにおいて各遺伝子のエクソン配列を決定した。また、マグロ属および他のサバ科魚類のゲノム配列を比較するとともに、sult1st6y/sult1st6aのホモログを用いた分子系統解析から、sult1st6yが出現した時期を推定することができた。

The quality of the product is determined by the selection of the candidate product. This is the first time that a person has ever been involved in an activity involving Escherichia coli. This is the first time I've ever seen a woman. Specific, sult1st 6y, specific single-guide RNA (sgRNA) design, fertilization, egg development, sgRNA and Cas9-specific quality treatment conditions were optimized. This is the beginning of the collection of information on the sequence of DNA sequences in the Assay for Transporse-Accessible Chromatin Sequencing (ATAC-seq). In the previous year, the sult1st 6a of the fish species was introduced into the fish species, and the PCR amplification was increased. The PCR amplification was used to determine the allocation of the gene. A comparison of the sequence of fish species of the family Trigonidae and other species was made using molecular systematics analysis and estimation of the time of their appearance.