異常DNAメチル化をターゲットとした腫瘍の微小残存病変検出法と超早期診断法の確立

肿瘤微小残留病灶检测方法及针对异常DNA甲基化的超早期诊断方法的建立

• 批准号: 21H02351
• 负责人: 山崎 淳平
• 金额: $ 11.32万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H02351/
• 关键词: DNAメチル化; エピジェネティクス; 早期診断; 微小残存病変; 癌; ゲノム

イヌの悪性黒色腫における特異的なDNAメチル化の変化を血漿中セルフリーDNAに応用し、次世代シークエンサーを用いて微小な腫瘍細胞を検出することによってイヌの悪性黒色腫の早期発見および治療後の新規方針策定につなげるため、R4年度は以下の項目について検討を行った。1. 腫瘍症例の臨床的評価・検体収集：北海道大学動物医療センターに来院する犬のリンパ腫および悪性黒色腫の症例、肛門嚢腺癌や移行上皮癌症例を追跡、組織サンプルを採取、また血漿を収集し凍結保存した。2. 解析候補メチル化領域の選抜：前年度の結果から、悪性黒色腫に関しては5か所のCpG配列に絞り込んである。その他の疾患については、特異的CpG配列の同定をすすめている。3. 症例サンプルのバイサルファイトターゲットシークエンス：悪性黒色腫の異なる症例および異なる日付ごとにそれぞれの5か所のPCR産物を混合後、次世代シークエンスによってデータを得た。この結果、各サンプルにおける１つのターゲット毎に数百万リードのデータを得られ0.0001%のメチル化を定量可能であることを確認した。また、クリーンベンチの導入により、2ndステップPCRにおけるコンタミネーションを大幅に減少させることができた。4. 臨床的評価との相関解析：悪性黒色腫8症例における延べ22個の異なる症例かつ異なる日付の血漿サンプルについて、上記5か所のDNAメチル化定量を行った。このうち、数症例において同時に評価した腫瘍の進行度とDNAメチル化レベルとの相関がみ見られ、その変化幅は0.2%-1%ほどであった。これは、本研究で進めている定量感度によって初めて検出可能な微小な変化であり、想定していた仮説が正しいことが示唆されている。現在、同様な相関がより多くのサンプルで見られるかどうかサンプル数を増やしている。5. 超早期診断への応用：一次病院における同一個体の数か月～1年毎の定期健康診断サンプルを経時的に収集中である。

The following items were discussed in R4: early detection and post-treatment policy setting for the detection of micro-tumor cells in the plasma and in the next generation of specific DNA transformation. 1. Clinical evaluation of tumor cases, collection of specimens: Hokkaido University Animal Medical Center, Department of Animal Health, Department of Animal Health, Department 2. Analysis of candidate CpG field selection: the previous year's results, black swelling related to the five CpG alignment Other diseases include CpG, CpG and CpG. 3. The PCR products of five different genes were mixed and the next generation of PCR products were obtained. The results of this study were as follows: 1. Millions of people were killed and 0.0001% of them were killed. For example, if you want to reduce the number of PCR products, you can reduce the number of PCR products. 4. Clinical evaluation and related analysis: 8 cases of melanoma were diagnosed and 22 cases were diagnosed. Daily plasma samples were collected and DNA quantification was performed in 5 cases above. The number of cases in which the disease was diagnosed was 0.2%-1% at the same time. This study was conducted to determine the quantitative sensitivity of the possible changes and the possible changes. Now, the same kind of correlation between the two sides of the same coin, the number of pairs of coins, the number of coins, the number of coins, the 5. The use of ultra-early diagnosis: the number of months to 1 year of the same individual in a hospital

项目成果

Obese status is associated with accelerated DNA methylation change in peripheral blood of senior dogs.

肥胖状态与老年犬外周血 DNA 甲基化变化加速有关。

• DOI: 10.1016/j.rvsc.2021.07.024
• 发表时间: 2021
• 期刊: Research in Veterinary Science
• 影响因子: 2.4
• 作者: Yamazaki J;Maegawa S;Jelinek J;Yokoyama S;Nagata N;Yuki M;Takiguchi M
• 通讯作者: Takiguchi M

ヒストンアセチルアレベルの改変は血管肉腫細胞に抗腫瘍効果をもたらす

组蛋白乙酰水平的改变赋予血管肉瘤细胞抗肿瘤作用

• 发表时间: 2022
• 作者: 鈴木玲海;青島圭佑;山崎淳平;小林篤史;木村享史
• 通讯作者: 木村享史

Age estimation based on blood DNA methylation levels in brown bears

• DOI: 10.1111/1755-0998.13788
• 发表时间: 2023-04-05
• 期刊: MOLECULAR ECOLOGY RESOURCES
• 影响因子: 7.7
• 作者: Nakamura，Shiori;Yamazaki，Jumpei;Shimozuru，Michito
• 通讯作者: Shimozuru，Michito

Evaluation of responses to immunosuppressive therapy in dogs with suspected non‐regenerative immune‐mediated anaemia: 11 cases (2012‐2018)

疑似非再生性免疫介导性贫血犬对免疫抑制治疗反应的评估：11例（2012-2018）

• DOI: 10.1111/jsap.13614
• 发表时间: 2023
• 期刊: Journal of Small Animal Practice
• 影响因子: 1.6
• 作者: Morishita K.;Sugawara‐Suda M.;Yamazaki J.;Sasaki N.;Nakamura K.;Ohta H.;Takiguchi M.
• 通讯作者: Takiguchi M.

犬尿路上皮癌におけるPDXモデルの樹立

犬尿路上皮癌PDX模型的建立

• 发表时间: 2022
• 作者: 森下大暉;木之下怜平;青島圭佑;細谷謙次;山崎淳平;滝口満喜
• 通讯作者: 滝口満喜