黄色ブドウ球菌新たな病原機構の究明と防御ワクチン抗原の探索

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本年度の研究は主に人及び動物臨床分離株の多くが産生するSECとSEHを中心に、SEsの新たな病原機構を解析し、ブドウ球菌と宿主の攻防メカニズムを解析した。特に、スーパー抗原活性を欠損させた変異毒素を作製し、これらの毒素が宿主細胞との接着・結合性について分子・細胞レベルで検討した。まずは、SEH及び無毒変異mSEHタンパクの作製・精製 (Large scale) を行い、SEHを産生する菌株からゲノムDNAを抽出・精製し、seh 遺伝子を発現ベクター pGEX-6p-1に組換え、GST-fusion protein system により大腸菌タンパク発現系を構築した。また、site-directed mutation法により、SEH分子上のスーパー抗原活性部位を変異させ、無毒変異mSEHを作製し、large scaleにより大量精製した。続いて、SEs遺伝子ノックアウト菌株の作製とブドウ球菌834臨床由来野生菌株との病原性の比較検討を行った。 SEs遺伝子を保有する菌株を用いて、シャットルカセットベクターを設計・構築し、毒素遺伝子をそれぞれノックアウトした isogenic mutant株(Δse) を作製した。さらに、Balb/cマウスに経静脈感染させ、SEs遺伝子ノックアウト菌株と野生株との生存率を比較する。並行して感染早期(3日目)の各変異株と野生株の脾臓、肝臓、腎臓中の生菌数を測定・比較した。野生株よりビルレンスが低下した変異株を選択できた。一方、マウスに経鼻粘膜感染させ、上皮細胞への付着性、持続時間、局所・全身炎症反応及びサイトカイン産生、マウスの生存率を比較検討し、ブドウ球菌持続感染におけるSEsの役割を解析中である。