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黄色ブドウ球菌新たな病原機構の究明と防御ワクチン抗原の探索

金黄色葡萄球菌新致病机制研究及保护性疫苗抗原的寻找

基本信息

批准号：
21H02371
负责人：
胡東良
金额：
$ 10.9万
依托单位：
Kitasato University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

本年度の研究は主に人及び動物臨床分離株の多くが産生するSECとSEHを中心に、SEsの新たな病原機構を解析し、ブドウ球菌と宿主の攻防メカニズムを解析した。特に、スーパー抗原活性を欠損させた変異毒素を作製し、これらの毒素が宿主細胞との接着・結合性について分子・細胞レベルで検討した。まずは、SEH及び無毒変異mSEHタンパクの作製・精製 (Large scale) を行い、SEHを産生する菌株からゲノムDNAを抽出・精製し、seh 遺伝子を発現ベクター pGEX-6p-1に組換え、GST-fusion protein system により大腸菌タンパク発現系を構築した。また、site-directed mutation法により、SEH分子上のスーパー抗原活性部位を変異させ、無毒変異mSEHを作製し、large scaleにより大量精製した。続いて、SEs遺伝子ノックアウト菌株の作製とブドウ球菌834臨床由来野生菌株との病原性の比較検討を行った。 SEs遺伝子を保有する菌株を用いて、シャットルカセットベクターを設計・構築し、毒素遺伝子をそれぞれノックアウトした isogenic mutant株(Δse) を作製した。さらに、Balb/cマウスに経静脈感染させ、SEs遺伝子ノックアウト菌株と野生株との生存率を比較する。並行して感染早期(3日目)の各変異株と野生株の脾臓、肝臓、腎臓中の生菌数を測定・比較した。野生株よりビルレンスが低下した変異株を選択できた。一方、マウスに経鼻粘膜感染させ、上皮細胞への付着性、持続時間、局所・全身炎症反応及びサイトカイン産生、マウスの生存率を比較検討し、ブドウ球菌持続感染におけるSEsの役割を解析中である。

This year, human and animal isolates were isolated from human and animal beds in this year, and the pathogens were analyzed in the SEC SEH Center, the pathogen analysis of new strains of SEs, and the attack and defense of hosts of cocci. The antigenic activity of antigens, antigens, toxins, toxins, Anti-toxic drugs, SEH and non-toxic mSEH strains were used to extract sperm (Large scale), SEH strains were isolated from DNA cells, seh cells were used to detect pGEX-6p-1 antibodies, and GST-fusion protein system strains were isolated from bacteria. The antigenic active part of SEH molecule was detected by site-directed mutation method, the active part of antigen was detected by site-directed mutation method, the active part of antigen was detected by large scale method, the active part of antigen was detected by Elisa, the active site of antigen was detected by Elisa, and a large number of sperm was detected by PCR. The pathogenicity of wild strains was higher than that of wild strains. The pathogenicity of wild strains was higher than that of wild strains. The pathogenicity of wild strains was higher than that of wild strains. SEs spores are kept in the presence of spores, and toxins. The spores of isogenic mutant strains (Δ se) are used as spores. The survival rate of wild strains was compared with that of wild strains, that of wild strains. At the same time, in the early stage of infection (3 days), the number of bacteria in spleen, liver and wild strains was determined. The wild plants were selected from the wild plants. On the one hand, the incidence of nasal mucosal infection, epithelial cell adhesion, retention time, local systemic inflammatory response and survival rate were compared. The survival rate of E. coli was compared with that of E. coli infection and SEs in the analysis.

项目成果

期刊论文数量（28）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Identification and characterization of a novel staphylococcal enterotoxin-like toxin in Staphylococcus aureus isolated from food poisoning

从食物中毒中分离出的金黄色葡萄球菌中新型葡萄球菌肠毒素样毒素的鉴定和表征

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
Ono Hisaya K.;Murayama Hiroki;Ojima Shinjiro;Hu Dong-Liang.
通讯作者：
Hu Dong-Liang.

食鳥処理場の鶏由来黄色ブドウ球菌の分子疫学調査と毒素遺伝子の解析

家禽屠宰场鸡源性金黄色葡萄球菌分子流行病学调查及毒素基因分析

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
小野久弥，木村珠子;岡本旺久;胡　東良
通讯作者：
胡　東良

High production of egc2-related staphylococcal enterotoxins caused a food poisoning outbreak

大量产生egc2相关葡萄球菌肠毒素引发食物中毒事件

DOI：
10.1016/j.ijfoodmicro.2021.109366
发表时间：
2021
期刊：
International Journal of Food Microbiology
影响因子：
5.4
作者：
Umeda Kaoru;Ono Hisaya K.;Wada Takayuki;Motooka Daisuke;Nakamura Shota;Nakamura Hiromi;Hu Dong-Liang
通讯作者：
Hu Dong-Liang

小型霊長動物コモンマーモセットを用いたブドウ球菌エンテロトキシン様毒素の嘔吐活性の評価

使用小型灵长类普通狨猴评价葡萄球菌肠毒素样毒素的催吐活性