权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

Development of nucleic acid vaccine for mucosal-application based on pharmaceutics and immunology -For Covid-19 prevention-

基于药剂学和免疫学开发粘膜应用核酸疫苗 -用于预防 Covid-19-

基本信息

批准号：
21H02648
负责人：
佐々木均
金额：
$ 11.07万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H02648/
关键词：
ワクチンナノ粒子 mRNA

项目摘要

新型コロナウイルス（SARS-CoV-2）のスパイクタンパク質全体をコードしたmRNAに加えて、スパイクタンパク質のうちサブユニット1またはヒトの細胞表面のAngiotensin-converting enzyme 2（ACE2）に結合するReceptor binding domain（RBD）をコードしたmRNAを作製した。また、より効果的な液性免疫の誘導のために細胞外分泌シグナルを結合させた分泌型スパイクタンパク質および分泌型RBDのmRNAを構築した。これらのmRNAを培養細胞に添加し、Western blot法を用いてタンパク質発現を評価したところ、目的の分子量の部分にSARS-CoV-2の抗原タンパク質のバンドが確認できた。さらに、検討したmRNAの中では分泌型RBDのmRNAが最もタンパク質発現効率が高かった。卵白アルブミン（OVA）をコードしたmRNAをmRNA微粒子DDSに搭載し、マウスの肺や鼻、眼へ複数回投与した。投与後のマウスから血液と脾臓を採取し、血清中のOVA特異的なIgG抗体の誘導とOVA刺激後の脾細胞からのINF-γの分泌を測定した。この結果、mRNA微粒子DDSの経肺投与でOVA特異的な液性免疫と細胞性免疫の強い誘導が確認できた。一方で、経鼻投与においては若干の細胞性免疫が誘導されたものの、液性免疫は検出されず、点眼投与では液性免疫と細胞性免疫の誘導効果はどちらも確認できなかった。また、予備的検討ではあるが、SARS-CoV-2の抗原をコードしたmRNAについては、OVAのmRNAを用いた場合と比較して免疫誘導効果が弱く、アジュバントの必要性が示唆された。

The new type of equipment is called Angiotensin-converting enzyme (SARS-CoV-2), which is used in combination with Receptor binding domain (RBD), cell surface (ACE2) and Receptor binding domain (RBD) to make full use of the mRNA. The liquid immune response (LIA) of the mice and the fruits of the mice showed that the exocrine immune response (ECS) was combined with the secretion of RBD (secreted RBD). The mRNA cells were added, and the Western blot method was used to detect the molecular weight of SARS-CoV-2 antigens and to confirm the molecular weight of the cells. The rate of secretory RBD mRNA was the highest among the three types of mRNA. Egg white egg white (OVA), egg white, egg white, egg, lung, nose, eye, nose, nose, eye, nose, After injection, the spleen was collected, and the specific IgG antibody of OVA in the serum was used to determine the secretion of IFN-γ in the spleen cells after OVA stimulation. The results showed that mRNA microparticle DDS was injected into lung and the cellular immunity of OVA specific antibody was enhanced to confirm the immune response. One side, intranasal intranasal instillation and intranasal intranasal instillation. There are several types of cellular immune response, such as cellular immunity, liquid immunity, eye contact and fluid immunity. The vaccine, the antigen of SARS-CoV-2, the antigen of mRNA, the antibody of OVA, the combination of antigens, and the immunizations of vaccine were weaker than those of immunization. the results showed that it was necessary to express the necessity of immunization.