難治性リンパ腫の免疫回避機構の解明と新しい治療法の開発

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今年度は前年度に引き続きRNAシークエンスより得られた情報から宿主免疫細胞へ影響を及ぼす可能性のある、有望な遺伝子を抽出し、この遺伝子に着目した以下のような機能解析を行った。（1）in vitroにおける解析：細胞傷害性T細胞とMHC class I分子のノックアウト細胞株との共培養実験を行い、細胞傷害性T細胞の表現型の変化（特にexhaustion marker)に着目した解析を行った。次に着目している分子の阻害薬を投与し、同様の共培養実験を行い、非投与群と比較して細胞傷害性T細胞の表現型の変化を解析した。興味深いことに、阻害薬投与ではexhaustionからの回復がみられ、MHC分子低下により着目分子を介した宿主免疫環境における影響が示唆された。（2）患者検体におけるvalidation：次に前年度で収集した患者検体（ホルマリン固定パラフィン包埋検体：N=90例程度）を用いてtissue microarrayを作成し、着目分子とMHC class I分子の免疫組織化学的検索を行い、これらの分子の発現に排他的関係にあることが証明された。また、蛍光多重染色を用い、着目分子の発現がある症例において宿主免疫細胞（特にexhaustion markerを有する細胞傷害性T細胞)が多く存在することがわかり、in vitroの実験結果を支持する結果と考えられた。（3）マウス由来Bリンパ腫細胞株において同様にMHC class IをCRISPR-Cas9システムを用いてノックアウトを行い、ヒト由来細胞株と同様に着目分子が上昇することをRNAおよびタンパクレベルで見いだした。