B型肝炎ウイルスに感染するマウス肝臓細胞の作製

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昨年度は組換えHBV Coreタンパク質をビオチン化し、プロテインアレイを行い、HBVの宿主因子としてSSBP3を同定した。本年度はプロテインアレイに加えて、免疫沈降法でHBV coreタンパク質と結合する宿主因子の同定を行った。HBV coreをHepG2およびHuh7細胞で発現させて、免疫沈降を行い、LC-MS/MSによるショットガン解析によって、HBV coreタンパク質と結合する宿主因子の同定を行った。その結果、HepG2細胞で327タンパク質、Huh7細胞で72タンパク質が同定できた。HepG2とHuh7細胞の両方で同定された宿主因子は59タンパク質だった。さらにプロテインアレイでも同定された宿主因子をピックアップした結果、FIP1L1、RBMX、PARP1の3タンパク質が同定できた。これらの宿主因子が実際に細胞内で結合するかを免疫沈降法で確認した結果、3つのタンパク質はHBV coreと結合することが確認できた。これらの3つのタンパク質に対するsiRNAをHpG2-NTCP細胞に導入し、それぞれの因子をノックダウンし、HBVを感染させると、RBMXのみでHBV感染の減少が見られた。