B型肝炎ウイルスに感染するマウス肝臓細胞の作製

感染乙型肝炎病毒的小鼠肝细胞的产生

• 批准号: 21H02742
• 负责人: 西辻 裕紀
• 金额: $ 11.15万
• 依托单位: Fujita Health University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H02742/
• 关键词: HBV; cccDNA; core; Core

昨年度は組換えHBV Coreタンパク質をビオチン化し、プロテインアレイを行い、HBVの宿主因子としてSSBP3を同定した。本年度はプロテインアレイに加えて、免疫沈降法でHBV coreタンパク質と結合する宿主因子の同定を行った。HBV coreをHepG2およびHuh7細胞で発現させて、免疫沈降を行い、LC-MS/MSによるショットガン解析によって、HBV coreタンパク質と結合する宿主因子の同定を行った。その結果、HepG2細胞で327タンパク質、Huh7細胞で72タンパク質が同定できた。HepG2とHuh7細胞の両方で同定された宿主因子は59タンパク質だった。さらにプロテインアレイでも同定された宿主因子をピックアップした結果、FIP1L1、RBMX、PARP1の3タンパク質が同定できた。これらの宿主因子が実際に細胞内で結合するかを免疫沈降法で確認した結果、3つのタンパク質はHBV coreと結合することが確認できた。これらの3つのタンパク質に対するsiRNAをHpG2-NTCP細胞に導入し、それぞれの因子をノックダウンし、HBVを感染させると、RBMXのみでHBV感染の減少が見られた。

去年，重组HBV核心蛋白是生物素化的，并将蛋白质驱动以识别SSBP3为HBV的宿主因子。除蛋白阵列外，通过免疫沉淀法鉴定了与HBV核心蛋白结合的宿主因子。 HBV核心在HEPG2和HUH7细胞中表达，进行免疫沉淀，并使用LC-MS/MS通过shot弹枪分析鉴定与HBV核心蛋白结合的宿主因子。结果，在HEPG2细胞中鉴定了327种蛋白质，并在HUH7细胞中鉴定了72种蛋白质。在HEPG2和HUH7细胞中鉴定出的宿主因子为59蛋白。此外，我们选择了在蛋白质阵列中鉴定出的宿主因子，并且由于鉴定了三种蛋白质FIP1L1，RBMX和PARP1。我们通过免疫沉淀确认了这些宿主因子是否真的在细胞内结合，并证实了三种蛋白质与HBV核心结合。当将这三种蛋白质的siRNA引入HPG2-NTCP细胞中，击倒每个因子并被HBV感染时，单独的RBMX显示HBV感染的降低。