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網羅的遺伝子ノックアウト技術を活用した新規がんー免疫チェックポイント標的薬の創製

利用综合基因敲除技术创建新型癌症免疫检查点靶向药物

基本信息

批准号：
21H02786
负责人：
藤木文博
金额：
$ 11.07万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H02786/
关键词：
癌免疫 CRISPR-Cas9 癌免疫療法 CRISPR gRNA TCF-1 CRISPR gRNA library メモリーT細胞疲弊T細胞 CRISPR-gRNA library 腫瘍免疫 CRISPR

项目摘要

CRISPR-gRNA libraryによる網羅的遺伝子ノックアウトを活用した新しい「癌－免疫チェックポイント標的」を同定することを目指して、T細胞に焦点を当てて研究を行った。T細胞の機能低下に関与する遺伝子として前年度までに遺伝子X（未公表のため仮称）を同定し、遺伝子XをT細胞で特異的に欠損するコンディショナルノックアウトを作製した。担癌マウスに癌抗原特異的遺伝子X欠損T細胞を移植することで腫瘍の増大を抑制し、マウスの生存期間を有意に延長することができた。この遺伝子X欠損T細胞の強い抗腫瘍効果は、腫瘍局所へのT細胞の集積が理由として考えられた。そのメカニズムを解析したところ、遺伝子X欠損T細胞の腫瘍局所への集積は、リンパ節を欠損しているマウスでも観察されたことから、リンパ節からの動員や抗原提示とは関係がない機序であることが分かった。結果として腫瘍環境下での生存能の亢進がその大きな要因であることが判明した。興味深いことに、遺伝子X欠損T細胞は野生型と同様に、腫瘍局所においてPD-1分子を高発現しており、遺伝子X欠損T細胞とPD-1分子に対する免疫チェックポイント阻害療法の併用によって強い抗腫瘍効果を惹起することに成功した。また、癌免疫療法の基盤であるTCF-1陽性T細胞の誘導・維持に関与する遺伝子を同定するためTCF-1レポーターマウスを作製した。このTCF-1レポーターマウスとCas9マウスを交配することでCas9発現TCF-1レポーターマウスを作製し、TCF-1の誘導・維持に重要な遺伝子をCRISPR gRNAライブラリを用いて探索を進めている。

CRISPR-gRNA library is a new tool for identifying cancer-immune targets, focusing on T cell research. T cell dysfunction is related to gene expression in the past year, gene expression in the past year. Cancer antigen specific gene X deficient T cell transplantation, tumor growth inhibition, tumor survival, intentional prolongation The reason for the accumulation of T cells in the tumor is that the T cells in the tumor are deficient in X. The analysis shows that there is a lack of accumulation of T cells in the brain, and that there is a lack of mobilization of T cells in the brain The results showed that the survival ability was increased under the condition of tumor. The combination of anti-tumor therapy and immunosuppressive therapy was successful in eliciting the effect of strong anti-tumor therapy. TCF-1 positive T cell induction and maintenance in cancer immunotherapy The TCF-1 gene was detected by Cas9, and the TCF-1 gene was detected by Cas9. The TCF-1 gene was controlled by Cas9, and the TCF-1 gene was induced and maintained. The CRISPR gRNA gene was used to explore the gene.