Bidirectional cellular signaling between microbeam targeted cancer cells and normal cells.

微束靶向癌细胞和正常细胞之间的双向细胞信号传导。

基本信息

批准号：
21H02875
负责人：
小西輝昭
金额：
$ 11.23万
依托单位：
National Institutes for Quantum Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2026-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

本課題は、低酸素環境下における放射線誘発バイスタンダー応答解析が主題である。そのため、低酸素下での細胞培養・照射・解析が可能な実験環境の整備が必然となる。これまでに導入した低酸素ワークステーションを用いて、低酸素環境での細胞試料の作成、培養および処理条件の最適化を進めた。また、低酸素環境下（酸素濃度１％）での高分解能なマイクロビーム細胞照射を実現するために、新規にステージならびにマイクロビーム照射装置の顕微鏡ステージにマイクロビーム細胞皿を設置するための固定具・容器等の設計および製作を行った。現在、最適化を進めている。上記と並行して、ヒト肺がんA549細胞、ヒト肺正常TIG1細胞の低酸素環境下での培養条件において、低酸素下での倍加時間やコロニー形成率、また、さらには、低酸素下での放射線抵抗性の要因の一つとして考えられているHypoxia Inducible Factor 1 α(HIF１α)の発現量の確認を行った。低酸素環境下での培養条件において、両細胞ともにHIF1αの発現増加を確認した。そして、ミトコンドリア状態の指標の一つである膜電位を蛍光プロープでの検出系の確立をめざし、低酸素環境下でのライブセル観察を可能にするタイムライプス蛍光観察系を確立した。本装置を用いて細胞培養および蛍光量定量化解析を開始した。さらに本装置を用いて、低酸素環境下の培養細胞のエネルギー代謝は解糖系が亢進による細胞内pHが低下を測定するために、pHに応じて青色から緑色に変化する蛍光を有するウミサボテン由来GFPを安定発現する細胞株を作成した。現在、X線照射し、取得したクローンの特性評価を進めている。

该主题是在低氧环境中对辐射诱导的旁观者反应的分析。因此，不可避免地可以在缺氧下用于细胞培养，辐射和分析。使用到目前为止介绍的缺氧工作站，我们一直在低氧环境中使用细胞样品的制备，从而优化了培养和加工条件。此外，为了在低氧气环境（氧气浓度1％）下实现高分辨率的微孔细胞照射，设计和制造了用于在微型辐射装置的舞台和显微镜阶段安装微孔细胞均匀的设计和制造。目前，优化正在进行中。与上述相关的是，在人肺癌A549细胞和正常的人肺TIG1细胞的培养条件下，缺氧，菌落形成率和表达水平的倍增时间和低氧诱导因子1α（HIF1α）的表达水平被认为是引起低氧辐射抗性的因素之一。在低氧环境下的培养条件下，两个细胞均显示HIF1α表达的增加。然后，为了建立一个用于检测膜电位的系统，这是线粒体状态的一种指标，使用荧光探针，这是一种时间唇形荧光观察系统，该系统可以在低氧环境中实现活细胞观察。使用此设备开始使用荧光定量的细胞培养和定量分析。此外，使用该设备，我们创建了一个细胞系，该细胞系稳定地表达了源自肋骨仙人掌的GFP，该GFP具有荧光，该荧光从蓝色变为绿色，响应在低氧环境下培养细胞的能量代谢。目前，我们正在进行X射线辐照的克隆的表征。

项目成果

期刊论文数量（14）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Hypoxia and Gap Junction Communication-Induced Bystander Effect

缺氧和间隙连接通讯引起的旁观者效应

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
Narongchai Autsavapromporn; Alisa Kobayshi; Daisuke Ohsawa; Cuihua Liu; Churdsak Jaikang; Tengku Ahbrizal Tengku Ahamad; Masakazu Oikawa; Teruaki Konishi
通讯作者：
Teruaki Konishi

マレーシア原子力庁(マレーシア)

马来西亚原子能机构（马来西亚）