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Elucidation of glycan structures in tumor antigens using high-density lectin arrays

使用高密度凝集素阵列阐明肿瘤抗原中的聚糖结构

基本信息

批准号：
21H03009
负责人：
和田聡
金额：
$ 11.15万
依托单位：
Showa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

キメラ抗原受容体遺伝子導入T細胞療法（CAR-T療法）は有望ながん免疫療法として注目され、血液がんにおいて高い抗腫瘍効果が認められた。一方、固形がんでは明らかな抗腫瘍効果はまだ認めていない。その原因として標的抗原が少ないことが挙げられる。申請者はこれまでに固形がんの根幹に関わる分子としてPIGRを同定した。PIGRは腫瘍細胞で強い発現が見られるが、一方で一部の正常細胞でも発現が認められる。そこで本研究では、正常細胞と腫瘍細胞を究極的に見分ける方法を確立するために、正常細胞と腫瘍細胞でのPIGR上の糖鎖構造の相違について検討を行った。糖鎖解析は非常に複雑であり、遺伝子解析における次世代シーケンサーのような手軽に解析できるツールがないため開発が進んでいないが、本研究では世界最先端のグライコーム解析を用いて、正常細胞と腫瘍細胞におけるPIGR上の糖鎖構造について解析を行った。膵臓がん腫瘍組織検体（90症例）を用いたPIGRの免疫染色の解析結果から、膵臓がん腫瘍組織11検体分において正常腸管細胞と腫瘍細胞の両方にPIGR分子の発現を認めた。そこで、この膵臓がん腫瘍組織11検体を用いて正常腸管細胞及び腫瘍細胞をレーザーマイクロダイゼクション法(LMD法)を用いて分離した。次に分離した細胞のPIGR分子を免疫沈降にて単離してそれぞれレクチンアレイ解析を行った。その解析により一部正常細胞と腫瘍細胞上の糖鎖を認識するレクチンの相違を認めた。現在更なる解析を行っている。また、PIGR分子に対する抗体作製にも着手しており、抗原ワクチン後の抗体を採取し、ハイブリドーマを作製中であるが良い抗体が取れていないのが現状である。抗体作製委託も並行して行っている。今後作製した抗体が認識する糖タンパクについて解析を行う。

Antigen receptor gene introduction T cell therapy (CAR-T therapy) is expected to be successful in immunotherapy and anti-tumor therapy. A square, solid shape The reason for this is that the target antigen is too small. The applicant is determined by the number of molecules involved in the root cause. PIGR is a strong tumor cell and a normal cell. In this study, we established a method for the final analysis of PIGR in normal cells and tumor cells. This study is the first in the world to analyze the glycan structure in normal cells and tumor cells. The expression of PIGR in 11 tumor tissue samples (90 cases) was detected in normal intestinal cells and tumor cells. 11 samples of tumor tissue were isolated from normal intestinal cells and tumor cells by the LMD method. The PIGR molecules in these cells were isolated and analyzed in vitro. A part of normal cells and tumor cells were analyzed and identified. Now it's time for more analysis. Antibodies against PIGR molecules are currently in the process of being produced. The antibody system is entrusted with the task of parallel operation. In the future, we will make efforts to understand the antibody and analyze it.