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加齢黄斑変性におけるセリン/スレオニンキナーゼLRRK2の病態意義解明

阐明丝氨酸/苏氨酸激酶LRRK2在年龄相关性黄斑变性中的病理意义

基本信息

批准号：
21H03091
负责人：
野田航介
金额：
$ 10.98万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

加齢黄斑変性(AMD)の病態基盤には網膜色素上皮細胞(RPE)の変性や細胞死が関与している。AMD患者ではパーキンソン病の発症リスクが有意に高いとする報告が近年相次いでおり、パーキンソン病が神経変性疾患であることから、この2つの疾患には共通病態が存在する可能性があると仮説を立てた。本研究の目的は、「AMDにおけるパーキンソン病との共通病態を探索すること」である。Leucine-rich repeat kinase 2(LRRK2)は、パーキンソン病の重要な病態責任分子の1つである。令和4年度は、ヒト摘出眼球切片を用いた免疫染色を行い、RPEにLRRK2が局在することが確認された。次に、培養RPE細胞株を用いたin vitro実験を行った。RPEに酸化ストレスを負荷すると、LRRK2のmRNAおよび蛋白の増加が認められた。続いて、RPEにおけるLRRK2発現増加が細胞機能に及ぼす影響を解析するため、哺乳細胞用バキュロウイルスBacMamシステムを用いてLRRK2を過剰発現させた。RPEにおけるLRRK2の過剰発現により、細胞生存性の低下とCaspase3/7活性の亢進が生じていた。また、LRRK2を過剰発現したRPEではαシヌクレイン蛋白量の増加とリン酸化の亢進が認められた。αシヌクレインのmRNAは変化しなかったことから、このαシヌクレインの増加は蛋白レベルの変化であると考えられた。更に、in vivo実験においてLRRK2の活性が亢進する遺伝子変異であるLRRK2-G2019Sを導入したトランスジェニックマウスでは野生型と比較し網膜電図の振幅の低下が認められた。これらの結果から、LRRK2の増加がRPE細胞死を引き起こし、in vivoにおいてはLRRK2活性の亢進により網膜機能の障害が生じる可能性が示された。

Addition of macular leprosy (AMD) pathogens, mutated pigment epithelial cells (RPE), idiopathic cytopathic cell death (CDC) and mutant cell death (CDC). Patients with AMD are suffering from diseases, symptoms, symptoms, The purpose of this study is to explore the common symptoms of diseases in order to explore the common symptoms. Leucine-rich repeat kinase 2 (LRRK2), disease, disease and disease. In 2004, the eyeball sections were taken out with immunostaining method, and the RPE LRRK2 bureau confirmed the eyeball sections by immunostaining. The cell lines of secondary culture and culture of RPE were used to test the cell line of RPE. RPE acidified protein, LRRK2mRNAs, proteins. For example, RPE, LRRK2, and so on, can be used in the analysis of cell phone and breast-feeding cell. RPE infection caused LRRK2 infection, decreased cell viability, and increased Caspase3/7 activity. The levels of RPE and LRRK2 were significantly higher than those of the control group (P < 0.01). The alpha protein, protein, mRNA, protein, etc. The activity of LRRK2 is higher in in vivo than in network. The amplitude of the wild type is lower than that of the network. The results show that LRRK2 plus RPE cell death induces pregnancy, in vivo increases the activity of LRRK2, and the possibility that the network membrane mechanism can block the health of health workers is significant.