新規癌遺伝子５ＭＰ１によるｎｏｎ－ＡＵＧ翻訳制御の生物学的役割に関する研究

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本年度は課題１の5MPによる翻訳制御のゲノムワイドな効果を明らかにする手法であるribosome profilingの導入を、海外より専門家を招いて行った。広島大学の外国人特任助教招聘制度を活用し、コーネル大学のShu-bing Qian研究室よりXin Shu特任助教、コーク大学のParval Baranov研究室よりMartina Yordanova特任助教を招聘した。コロナ禍により入国が大幅に遅れたものの、夏休み期間中に来日し、薬剤処理を施した癌細胞や受精初期の卵細胞を用いたライブラリを作成し次世代塩基配列決定法によって翻訳が制御されるコード領域を同定した。課題３のアデノ随伴ウイルスの翻訳制御について、5MP1とRep78, Rep68, Rep40の相互作用をBLI法により解析した。Rep78に特異的に存在するC末端断片が5MP1との高い親和性に必要であること、この断片が関わる相互作用が5MP1の酸性表面に依存することを見出した。アデノ随伴ウイルスの「ポリシストロニック」mRNAであるVP2・VP3 mRNAの全てのシストロンのルシフェラーゼレポーターを作成し、ヒト細胞内でnon-AUG開始コドンからの翻訳をエンハンスするRNA領域を二つ同定した。遺伝子治療ベクターとして使用されるアデノ随伴ウイルスの産生量を増やすというゴールに向けて、この二つのエンハンサー領域の相互作用因子を同定する実験を計画中である。