权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

RNA反応性RNAウイルスベクターによる細胞挙動の制御

RNA反应性RNA病毒载体控制细胞行为

基本信息

批准号：
19K15988
负责人：
高橋慧
金额：
$ 2.08万
依托单位：
Okinawa Institute of Science and Technology Graduate University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2021-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

現在までに、人工的に設計されたRNAウイルスベクターから発現された、その3'末端非翻訳領域(3'UTR)に人工自己開裂型リボザイムが組み込まれた外来性遺伝子(レポーター遺伝子)の発現を、上記リボザイムに対応する低分子化合物および人工RNAの有無によって制御できることが明らかとなった。次に、生物学的なRNA分子(標的RNA)の有無に応じてRNAウイルスベクターから発現されたレポーター遺伝子の発現を制御することができるかどうかを検証した。標的RNA分子として、ある抗原に対する抗体で細胞を処理することでその遺伝子発現が上昇することが知られている内在性遺伝子のmRNAを選択した。レポーター遺伝子の3'UTRに標的RNAの塩基配列に相補的な塩基配列を含んだ人工自己開裂リボザイムを組み込み、そのレポーター遺伝子を発現するRNAウイルスベクターを作製した。その後、上記抗体で処理された細胞へこのRNAウイルスベクターを感染させた。しかし、抗体処理の有無によるレポーター遺伝子の発現量の差は認めることができなかった。そのため、標的RNAを薬剤処理によって過剰発現することができる細胞を作製し、その細胞を用いてレポーター遺伝子の発現を薬剤処理の有無によって制御できるかどうかを検証した。その結果、薬剤処理の有無(標的RNAの有無)によってレポーター遺伝子の発現量に差を見出すことができた。この結果から、人工RNAだけでなく内在性遺伝子と同等のmRNAによってもレポーター遺伝子の発現を制御できることが明らかとなった。本系で内在性遺伝子を検出できなかった理由として、今回標的RNAとして選択した内在性遺伝子の発現量は一般的に一時的かつ低いことが考察される。そのため、標的RNAがある程度持続的かつ十分量発現されていることが本系においては必要不可欠であると推測される。

Now, artificially designed RNA fragments can be detected in the 3'UTR region, and artificially cleaved RNA fragments can be detected in the 3'UTR region. In this paper, the low molecular weight compounds and artificial RNA fragments can be detected in the 3'UTR region. Second, biological RNA molecules (target RNA) are not detected in the presence or absence of RNA molecules. The target RNA molecule is selected from the group consisting of an antigen and a gene. The complementary nucleotide sequences of the target RNA in the 3'UTR of the DNA sequence include artificial cleavage, and the RNA sequence generated by the DNA sequence is controlled. After that, the antibody was used to treat the cells. The difference in the amount of protein produced by antibody treatment is recognized. The presence or absence of target RNA processing, including detection of cellular activity, and detection of cellular activity using target RNA processing. The results of the test, the presence or absence of the agent (the presence or absence of the target RNA), and the difference in the amount of the agent detected are shown. The result is that artificial RNA can be used to control the expression of endogenous genes and their mRNA equivalents. In this system, the intrinsic gene is detected for a reason, and the target RNA is selected for the detection of the intrinsic gene. The target RNA was found to be highly persistent, but the system was not necessarily predictable.