Analysis of a novel protein FAM189A2 in the receptor endocytosis.

受体内吞作用中新型蛋白 FAM189A2 的分析。

• 批准号: 19K16569
• 负责人: 角田 拓実
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Aichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-01 至 2020-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K16569/
• 关键词: 乳癌; FAM189A2; ユビキチン; endosome; ENTREP; CXCR4; エンドサイトーシス; 膜蛋白; ユビキチン化

一部の乳癌において発現低下しているFAM189A2の機能は一切不明であった。予測される一次構造はアミノ末端のシグナル配列に加え1つの膜貫通ドメインを持つI型膜蛋白であったため、細胞内領域をbaitとし、複数の乳癌細胞株から作成したcDNAライブラリーをpreyとするyest two-hybridスクリーニングを行った。その結果、ITCH,NEDD4Lなど複数のHECT型ユビキチンE3リガーゼやclathrin依存性endosomeに必修のアダプターEpsin1などが見つかった。これらを強制発現させた免疫沈降実験では、ITCHはそのWWドメインとFAM189A2のPPxYモチーフを介し結合すること、FAM189A2をK48優位のポリユビキチン化すること、さらにユビキチン化FAM189A2はEpsin1と結合し、細胞表面からendosomeに取り込まれることを見出した。さらに乳癌転移や癌幹細胞化に重要な作用をもたらすケモカイン受容体CXCR4は、リガンド依存性にITCHによりユビキチン化されendosomeに取り込まれること（内在化）が知られていたが、CRISPR/CAS9法にてFAM189A2を破壊した乳癌細胞ではリガンド刺激でのCXCR4内在化は起こらず、ERK1/2リン酸化状態が遷延すること、一方同細胞のFAM189A2強制発現によりリガンド依存性内在化が回復することを見出した。またpublic databaseを用いた長期予後解析ではFAM189A2低発現乳癌症例は有意に無再発生存期間が短く、この傾向は特にホルモン受容体陽性乳癌で顕著であった。以上を踏まえ、これまで一切の機能が不明であったFAM189A2遺伝子をENTREP(ENdosomal TRansmembrene with EPsin binding)としてDDBJを介し遺伝子登録した。

在某些乳腺癌中降低的FAM189A2的功能尚不清楚。预测的一级结构是一种I型膜蛋白，除了在氨基末端的信号序列外，还具有一个跨膜结构域，因此，使用细胞内区域作为诱饵和一个由多个乳腺癌细胞系创建的cDNA库，以捕食为prey，对amino末端的信号序列进行。结果，发现了多种Hect型泛素E3连接酶，例如瘙痒和NEDD4L，以及针对网格蛋白依赖性内体的所需适配器EPSIN1。在这些被迫表达的免疫沉淀实验中，我们发现瘙痒通过FAM189A2的PPXY主题与其WW结构域结合，FAM189A2的多泛素化，即K48主要的多泛素化，并与泛素化的FAM189A2结合到Epsin1和epsinos cinters and Opsose。此外，众所周知，CXCR4是一种对乳​​腺癌转移和癌症干细胞形成具有重要作用的趋化因子受体，是由瘙痒依赖性地依赖于瘙痒并通过内体（内部化）吸收的，但发现在乳腺癌中，使用CRIS9 riD rig and Intern Internal Internife，在乳腺癌中破坏了FAM189A2。磷酸化状态继续进行，而在同一细胞中FAM189A2的强行表达恢复了配体依赖性内在化。此外，在使用公共数据库的长期预后分析中，低表达乳腺癌的病例表现出明显的无复发生存率，这种趋势在激素受体阳性乳腺癌中尤为明显。基于上述情况，以前没有功能的FAM189A2基因通过DDBJ注册为Entrep（具有Epsin结合的内体跨膜）。

项目成果

愛知医科大学医学部病理学講座

爱知医科大学医学院病理学系