ファージセラピーの実用化に向けた非増殖性ファージの創出

昨年度は、非増殖性ファージの社会実装に向けて、モデルファージに限らず、多くのファージ種を改変するためのプラットフォーム技術「ファージ合成改変技術」の確立を目指した。この技術の流れは、1) ファージゲノムを構築するためのDNA断片を増幅する。この時、各断片の両末端に隣の断片の末端30 bpの相同配列が付加されるようにプライマーを設計する。2) 各断片を混ぜ、インビトロアセンブリシステムを利用してファージゲノムを構築する。3) 構築したファージゲノムをエレクトロポレーションで宿主細菌に導入し、ファージを創出する。この技術はイーストプラットフォームと同様に、不要な遺伝子の除去や機能性遺伝子の搭載など複数の改変を一度に施すことができる。また、ファージ創出までの時間も短くて済む。実際にこの技術を利用して、大腸菌ファージT3及びλ、サルモネラファージP22、シュードモナスファージgh-1、抗酸菌ファージD29、B1及びGS4Eを創出・改変することができた。また、データベースに登録されている配列を基に化学合成されたDNAから、抗酸菌ファージTM4を創出することにも成功した。これらの結果は、我々が確立したファージ合成改変技術は汎用性が高く、様々なファージ種に適用できることを示している。ファージ合成改変技術の確立、非増殖性ファージ創出技術の開発及びマウス敗血症モデルに対するファージセラピー実験の結果までをまとめ、論文公表した。(PNAS, DOI: 10.1073/pnas.2206739119)

昨年度は、非増殖性ファージの社会実装に向けて、モデルファージに限らず、多くのファージ種を改変するためのプラットフォーム技術「ファージ合成改変技術」の確立を目指した。この技術の流れは、1) ファージゲノムを構築するためのDNA断片を増幅する。この時、各断片の両末端に隣の断片の末端30 bpの相同配列が付加されるようにプライマーを設計する。2) 各断片を混ぜ、インビトロアセンブリシステムを利用してファージゲノムを構築する。3) 構築したファージゲノムをエレクトロポレーションで宿主細菌に導入し、ファージを創出する。この技術はイーストプラットフォームと同様に、不要な遺伝子の除去や機能性遺伝子の搭載など複数の改変を一度に施すことができる。また、ファージ創出までの時間も短くて済む。実際にこの技術を利用して、大腸菌ファージT3及びλ、サルモネラファージP22、シュードモナスファージgh-1、抗酸菌ファージD29、B1及びGS4Eを創出・改変することができた。また、データベースに登録されている配列を基に化学合成されたDNAから、抗酸菌ファージTM4を創出することにも成功した。これらの結果は、我々が確立したファージ合成改変技術は汎用性が高く、様々なファージ種に適用できることを示している。ファージ合成改変技術の確立、非増殖性ファージ創出技術の開発及びマウス敗血症モデルに対するファージセラピー実験の結果までをまとめ、論文公表した。(PNAS, DOI: 10.1073/pnas.2206739119)