結核菌・抗酸菌の遺伝子改変のためのマイコファージ様形質導入粒子の簡易作製法

制备用于结核分枝杆菌和分枝杆菌基因改造的类噬菌体转导颗粒的简单方法

• 批准号: 22K15456
• 负责人: 満仲 翔一
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Gifu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15456/
• 关键词: バクテリオファージ; 合成生物学; 遺伝子組換え

昨年度は、抗酸菌ファージXのパッケージングシグナル (以下、PSと記す)の探索を行なった。本来、PSはファージの頭部にファージゲノムをパッケージングするために必要なシグナル配列である。形質導入粒子の作製にPSの同定は必須である。そこで、ファージゲノム由来の配列約1 kbpを挿入したプラスミドを構築した。挿入した配列の中にPSが存在している場合、そのプラスミドを保持する細菌を介してファージを増殖させると、形質導入粒子が産生される。この形質導入粒子が感染すると、ファージゲノムではなくプラスミドが宿主細菌に導入される。実際に、構築したプラスミドを保持する抗酸菌を使ってファージライセートを調製し、そのライセートと抗酸菌を混ぜ、選択培地上に塗布した結果、複数のコロニーを確認した。解析の結果、これらのコロニーは構築したプラスミドを保持していることが判明した。また、抗酸菌と混ぜずにライセートをそのまま選択培地に塗布した場合及びファージゲノム由来の配列を挿入していないプラスミドを保持する抗酸菌から調製したライセートを混ぜた場合ではコロニーは出現しなかった。これらの結果は、形質導入粒子を介したプラスミドの宿主細菌への導入が起きたことを示しており、挿入した約1 kbp内にPSが存在している可能性を強く示唆するものである。ファージは産生されず、形質導入粒子だけを産生させるためには、さらにPSの最小単位を同定していく必要がある。しかし、ファージXは溶菌性ファージのため、このファージを基に研究を進めるのは難しい。そこで、今後はファージXと非常に相同性が高い溶原性ファージYを基に形質導入粒子の簡易作製法の確立を進めていく予定である。昨年度末に溶原性ファージYを分与していただいた。ファージゲノムの配列を再度確認後、PSの同定などを進めていく予定である。

Last year, the exploration of acid-resistant bacteria was carried out. Originally, PS was the first part of the game to be played in the game. The same determination of PS is necessary for the production of form-mass introduced particles. The structure of the system is about 1 kbp long. In the case where PS is present in the middle of the insertion sequence, bacteria are introduced into the medium to propagate and form introduced particles are produced. This plasmid is introduced into the host bacteria for infection and infection. In the process of construction, the acid resistant bacteria were mixed and the results of coating were confirmed. The result of the analysis is that the structure of the system is not stable. The acid resistant bacteria are mixed with each other in the application of coating materials and in the application of coating materials in the application of coating materials. This result shows that the introduction of PS into host bacteria mediated by plasmid-mediated particles can occur, which strongly indicates the possibility that PS can exist within approximately 1 kbp of the particle. The minimum unit of PS must be equal to the minimum unit of PS. The research on bacteriological properties and the development of bacteriological research in China is very difficult. The establishment of a simple process for the introduction of particles with high solubility in the future At the end of the year, the original solution was divided into two parts. After reconfirming the configuration of the PS, the PS is determined.