結核菌・抗酸菌の遺伝子改変のためのマイコファージ様形質導入粒子の簡易作製法

制备用于结核分枝杆菌和分枝杆菌基因改造的类噬菌体转导颗粒的简单方法

• 批准号: 22K15456
• 负责人: 満仲 翔一
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Gifu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15456/
• 关键词: バクテリオファージ; 合成生物学; 遺伝子組換え

昨年度は、抗酸菌ファージXのパッケージングシグナル (以下、PSと記す)の探索を行なった。本来、PSはファージの頭部にファージゲノムをパッケージングするために必要なシグナル配列である。形質導入粒子の作製にPSの同定は必須である。そこで、ファージゲノム由来の配列約1 kbpを挿入したプラスミドを構築した。挿入した配列の中にPSが存在している場合、そのプラスミドを保持する細菌を介してファージを増殖させると、形質導入粒子が産生される。この形質導入粒子が感染すると、ファージゲノムではなくプラスミドが宿主細菌に導入される。実際に、構築したプラスミドを保持する抗酸菌を使ってファージライセートを調製し、そのライセートと抗酸菌を混ぜ、選択培地上に塗布した結果、複数のコロニーを確認した。解析の結果、これらのコロニーは構築したプラスミドを保持していることが判明した。また、抗酸菌と混ぜずにライセートをそのまま選択培地に塗布した場合及びファージゲノム由来の配列を挿入していないプラスミドを保持する抗酸菌から調製したライセートを混ぜた場合ではコロニーは出現しなかった。これらの結果は、形質導入粒子を介したプラスミドの宿主細菌への導入が起きたことを示しており、挿入した約1 kbp内にPSが存在している可能性を強く示唆するものである。ファージは産生されず、形質導入粒子だけを産生させるためには、さらにPSの最小単位を同定していく必要がある。しかし、ファージXは溶菌性ファージのため、このファージを基に研究を進めるのは難しい。そこで、今後はファージXと非常に相同性が高い溶原性ファージYを基に形質導入粒子の簡易作製法の確立を進めていく予定である。昨年度末に溶原性ファージYを分与していただいた。ファージゲノムの配列を再度確認後、PSの同定などを進めていく予定である。

Last year, anti-acid bacteria were used to explore the behavior of acid-fast bacteria. (below, PS records). Originally, PS said that it was necessary to assign a column to each other. Shape lead-in particles are required to PS the same size. The reason for this is that the arrangement is about 1 kbp. In the configuration of PS, there is a combination of bacteria, colonization, and the shape of particles. The virus induces the particles to infect the virus, and the host bacteria enter the virus. In the international market, we need to keep the acid-fast bacteria in place to make sure that the acid-fast bacteria are mixed, select the results of the distribution of acid-fast bacteria on the ground, and make sure that they are correct. After analyzing the results, the results were analyzed and the results were analyzed. The combination of acid-fast bacteria, acid-fast bacteria, anti-acid bacteria, anti-acid bacteria, anti- The results of the experiment, the introduction of the particles into the host bacteria, the presence of the host bacteria, and the possibility of the presence of PS within about 1 kbp strongly indicate the possibility of instigation. The computer is used to generate data, the shape is imported into the particles, and the minimum bit of the PS is the same as that of the necessary particles. The basic research on bacteriolysis, bacteriolysis, bacteriolysis and basic research has been conducted. In the future, it is very similar to the high level of lysogenicity. The introduction of particles is easy to determine the accuracy of the method. At the end of last year, the score of lysogenicity was higher than that of lysogenicity. After checking that the configuration is confirmed again, the PS will confirm that you are going to make a decision.