Integrinを標的とした糸球体硬化進展の新規機序解明と特異的治療の開発

阐明肾小球硬化进展的新机制并开发针对整合素的特异性治疗方法

基本信息

批准号：
19K17701
负责人：
原怜史
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K17701/
关键词：
ポドサイト galectin-8 integrinα6 Integrin 糸球体硬化

项目摘要

ラット由来EA-1 hybridomaからのintegrinα6抗体の高密度培養を行ったが、高密度培養に用いたhybridoma上清中のラットIgG2a濃度は約3.7ng/mLと濃度が低いことにより十分な収量を得ることができなかった。より分泌濃度の高いhybridomaのクローンを選択し直すためにクローニングを行い、分泌濃度の高いクローンを同定した。現在、これらのクローンを用いて再度高密度培養を行っている。今後、十分量のintegrinα6抗体が得られれば、マウスへ投与し、病理学的解析を行う。また、これまでの実験結果により、蛋白尿が出現する様々な糸球体疾患においてgalectin-8の発現が亢進していたことから現時点の仮説として、ポドサイトにストレスがかかったり障害される状況においてgalectin-8が発現し、ポドサイトに対して保護的ないし侵襲的な役割を有すると考えられる。この仮説を検証するために、ヒト培養ポドサイトにアドリアマイシンを投与してポドサイトを障害させた際に、ポドサイトのgalectin-8発現が亢進するかどうかをウエスタンブロッティングで検討したところ、アドリアマイシン投与12時間、24時間と時間が経つにつれてポドサイトにおけるgalectin-8の分泌が低下していた。アドリアマイシンによりポドサイトは壊死することからgalectin-8が分泌できなくなる可能性を考え、今後はpuromycinによる軽度のポドサイト障害モデルで検討を行う予定である。

尽管进行了来自大鼠EA-1杂交瘤的整联蛋白α6抗体的高密度培养，但由于用于高密度培养的杂交瘤上清液中大鼠IgG2a的浓度未获得足够的产量。进行克隆以重新选择具有较高分泌浓度的杂交瘤克隆，并确定分泌浓度较高的克隆。当前，这些克隆被用于再次执行高密度培养。如果将来获得足够量的整联蛋白α6抗体，则将对小鼠进行施用并进行病理分析。此外，先前的实验结果表明，在各种肾小球疾病中已经增加了Galectin-8表达，其中出现蛋白尿，因此目前的假设是在压力或受损的情况下表达了Galectin-8的表达，并且被认为具有保护性或具有保护性的作用。为了检验这一假设，我们研究了在人类培养的足细胞中给予阿霉素时，足细胞中的lectectin-8表达增加了足细胞以损害足细胞，并发现足时间中的足细胞中galectin-8的分泌，从12小时降低到24小时，至24小时至24小时至施肥。考虑到阿霉素会导致足细胞坏死的可能性，从而阻止甲染蛋白8分泌，我们计划研究由紫霉素引起的轻度足细胞疾病模型。