Integrinを標的とした糸球体硬化進展の新規機序解明と特異的治療の開発

阐明肾小球硬化进展的新机制并开发针对整合素的特异性治疗方法

• 批准号: 19K17701
• 负责人: 原 怜史
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K17701/
• 关键词: ポドサイト; galectin-8; integrinα6; Integrin; 糸球体硬化

ラット由来EA-1 hybridomaからのintegrinα6抗体の高密度培養を行ったが、高密度培養に用いたhybridoma上清中のラットIgG2a濃度は約3.7ng/mLと濃度が低いことにより十分な収量を得ることができなかった。より分泌濃度の高いhybridomaのクローンを選択し直すためにクローニングを行い、分泌濃度の高いクローンを同定した。現在、これらのクローンを用いて再度高密度培養を行っている。今後、十分量のintegrinα6抗体が得られれば、マウスへ投与し、病理学的解析を行う。また、これまでの実験結果により、蛋白尿が出現する様々な糸球体疾患においてgalectin-8の発現が亢進していたことから現時点の仮説として、ポドサイトにストレスがかかったり障害される状況においてgalectin-8が発現し、ポドサイトに対して保護的ないし侵襲的な役割を有すると考えられる。この仮説を検証するために、ヒト培養ポドサイトにアドリアマイシンを投与してポドサイトを障害させた際に、ポドサイトのgalectin-8発現が亢進するかどうかをウエスタンブロッティングで検討したところ、アドリアマイシン投与12時間、24時間と時間が経つにつれてポドサイトにおけるgalectin-8の分泌が低下していた。アドリアマイシンによりポドサイトは壊死することからgalectin-8が分泌できなくなる可能性を考え、今後はpuromycinによる軽度のポドサイト障害モデルで検討を行う予定である。

The concentration of IgG2a in the supernatant of EA-1 hybridoma was about 3.7 ng/mL. The concentration of IgG2a in the supernatant of EA-1 hybridoma was about 10 ng/mL. The secretion concentration of the high hybridization rate is selected from the high hybridization rate and the high hybridization rate. Now, we're going to use this technology to cultivate high density cells. In the future, a very large amount of integrinα6 antibody will be obtained, and the analysis of pathology will be carried out. As a result, proteinuria appears in the presence of hyperactive galectin-8 in the presence of globular diseases, and in the presence of protective galectin-8. The expression of galectin-8 in the culture medium was increased in 12 hours and decreased in 24 hours during the period of inhibition. The possibility of secretion of galectin-8 is examined, and the degree of puromycin in the future is determined.