Integrinを標的とした糸球体硬化進展の新規機序解明と特異的治療の開発

ラット由来EA-1 hybridomaからのintegrinα6抗体の高密度培養を行ったが、高密度培養に用いたhybridoma上清中のラットIgG2a濃度は約3.7ng/mLと濃度が低いことにより十分な収量を得ることができなかった。より分泌濃度の高いhybridomaのクローンを選択し直すためにクローニングを行い、分泌濃度の高いクローンを同定した。現在、これらのクローンを用いて再度高密度培養を行っている。今後、十分量のintegrinα6抗体が得られれば、マウスへ投与し、病理学的解析を行う。また、これまでの実験結果により、蛋白尿が出現する様々な糸球体疾患においてgalectin-8の発現が亢進していたことから現時点の仮説として、ポドサイトにストレスがかかったり障害される状況においてgalectin-8が発現し、ポドサイトに対して保護的ないし侵襲的な役割を有すると考えられる。この仮説を検証するために、ヒト培養ポドサイトにアドリアマイシンを投与してポドサイトを障害させた際に、ポドサイトのgalectin-8発現が亢進するかどうかをウエスタンブロッティングで検討したところ、アドリアマイシン投与12時間、24時間と時間が経つにつれてポドサイトにおけるgalectin-8の分泌が低下していた。アドリアマイシンによりポドサイトは壊死することからgalectin-8が分泌できなくなる可能性を考え、今後はpuromycinによる軽度のポドサイト障害モデルで検討を行う予定である。

ラット由来EA-1 hybridomaからのintegrinα6抗体の高密度培養を行ったが、高密度培養に用いたhybridoma上清中のラットIgG2a濃度は約3.7ng/mLと濃度が低いことにより十分な収量を得ることができなかった。より分泌濃度の高いhybridomaのクローンを選択し直すためにクローニングを行い、分泌濃度の高いクローンを同定した。現在、これらのクローンを用いて再度高密度培養を行っている。今後、十分量のintegrinα6抗体が得られれば、マウスへ投与し、病理学的解析を行う。また、これまでの実験結果により、蛋白尿が出現する様々な糸球体疾患においてgalectin-8の発現が亢進していたことから現時点の仮説として、ポドサイトにストレスがかかったり障害される状況においてgalectin-8が発現し、ポドサイトに対して保護的ないし侵襲的な役割を有すると考えられる。この仮説を検証するために、ヒト培養ポドサイトにアドリアマイシンを投与してポドサイトを障害させた際に、ポドサイトのgalectin-8発現が亢進するかどうかをウエスタンブロッティングで検討したところ、アドリアマイシン投与12時間、24時間と時間が経つにつれてポドサイトにおけるgalectin-8の分泌が低下していた。アドリアマイシンによりポドサイトは壊死することからgalectin-8が分泌できなくなる可能性を考え、今後はpuromycinによる軽度のポドサイト障害モデルで検討を行う予定である。