くも膜下出血後早期脳損傷におけるLOX-1の役割

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ラットSAHモデルおよびコントロール群の作成を行い、以下の項目の検討を継続している。・酸化LDL、LOX-1の検出：脳血管壁における酸化LDL、LOX-1の免疫染色、及びRT-PCRによる発現量を計測する。本項目では、SAHモデルの脳血管壁において酸化LDL、LOX-1の発現が増加している可能性が示唆された。引き続き以下の項目の検討を進めていく。・神経細胞のapoptosis (ELISA)検出：Caspase3をELISAにて測定する。生体標本として取り出し-80℃にて保存した大脳皮質から蛋白を抽出し、ELISAにて測定、アポトーシスの指標とする。・血管内皮細胞のapoptosis (TUNEL染色)検出：両側基底核および両側脳皮質の切片を摘出し、TUNEL染色を行う。DNA断片化を光顕にてコントロール群と比較してアポトーシスの指標とする。・血液脳関門の破綻(Evans blue染色)：予めEvansblue(50mg/kg)を腹腔内投与し灌流固定する。測定値をEvans blueの標準曲線(0.5-40 μg/ml)から色素量として計算し、血液脳関門破綻の指標とする。・脳浮腫の程度(脳乾燥法)：生体摘出標本にて、脳乾燥による重量測定により、脳浮腫を評価する。・脳微小血栓の測定：脳皮質細動脈におけるFITC-dextran蛍光染色、Fibrinogen免疫染色、Collagen4免疫染色にて微小血栓の検出を行う。・脳内微小血管内皮細胞障害の測定：脳底動脈切片を摘出し、eNOS・MMP-9抗体染色およびELISAを行う。また、末梢血d-ROM測定を行い、酸化ストレスによる血管障害・炎症所見の指標とする。